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士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎?死而后已，不亦远乎?——《论语》

第七章重组克隆的筛选与鉴定

一、填空题

．1重组体的筛选有两层涵义，一是将，二

是将。

．2目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。

大致可以分为：(1)——(2)——(3)——

———————————等。(4)

．3噬菌斑形成选择法有两种判断标准，一是——，二是

。

．4PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于——

．5核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为一探针和———

—————————探针。

．6如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生3’突出的黏性末端，则可以用进行3’末端标

记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用——进行3’末端

标记。

．7单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)——(2)——(3)—

—。

．8根据Northern杂交的结果可以说明：——。

．9差示杂交(differentialhybridization)技术需要——。

10．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射DN

A探针杂交的技术称——。

11．在——技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)

上，然后与放射性的DNA探针杂交。

12．——使用核酸探针检测细胞和组织中特定核苷酸序列的位置。

13．为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构，可以用一个容易检测的报告蛋白制备——，然后跟踪报

告蛋白在细胞中的行为即可。

14．可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有——和——的活性。

15．硝酸纤维素膜(NC)结合DNA的能力为——，尼龙膜(Nylon)为

16．如果对一个克隆的基因进行遗传操作，使互补的链转录，会产生同正常的RNA转录物互补的—

—分子。

穷则独善其身，达则兼善天下。——《孟子》

17．在Southern印迹中，DNA转移的速度取决于和—

—.

I

．根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是18c基因的一——.

．用不对称19PCR合成单链DNA探针时，两个引物的浓度比为：——.

．微细胞是一种20E．coli的突变体，通常只有正常细胞的——，而且不含——.

．点杂交的主要缺点是—21—.

．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：22(1)——(2)—

—(3)——。

．阻断翻译杂交法是—23—同——的杂交。

．在切口移位标记探针时，24DNAaseI处理DNA的温度应控制在——，

温度过高，——，不利于标记.

．25Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：

—(1)—

—(2)—.

．放射免疫筛选的原理基于以下三点：26