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第七章蛋白质的分离、纯化与表征;1、蛋白质的理化性质：

酸碱性质、胶体性质与沉淀、颜色反应、变性

2、分离纯化的方法：

盐析、电泳、等电聚焦、层析等;蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。

在不同的pH环境下，蛋白质的电学性质不同。在等电点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动；在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动。这种现象称为蛋白质电泳;;蛋白质分子的颗粒直径已达1-100nm，处于胶体颗粒的范围。因此，蛋白质具有亲水溶胶的性质。

由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。

;蛋白质的胶体性质;在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。

在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。

可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。;在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。

由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。

如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。;一、蛋白质在某些理化因素的作用下，其空间结构受到破坏，从而改变其理化性质，并失去其生物活性，称为蛋白质的变性。;蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。;在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质严格的空间结构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变;蛋白质的变性;变性蛋白质主要标志是生物学功能的丧失。溶解度降低，易形成沉淀析出，结晶能力丧失，分子形状改变，肽链松散，反应基团增加，易被酶消化。

变性蛋白???分子互相凝集为固体的现象称凝固。

有些蛋白质的变性作用是可逆的，其变性如不超过一定限度，经适当处理后，可重新变为天然蛋白质。;引起蛋白质变性的因素有：;变性蛋白质的性质改变：;蛋白质变性的可逆性：;核糖核酸酶的变性与复性;蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。;反应名称

;大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。

这三种氨基酸的在280nm附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm附近显示强的吸收。

利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定。;蛋白质的分离与纯化方法;常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。

盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。

盐析沉淀蛋白质时，通常不会引起蛋白质的变性。;分段盐析：;2.有机溶剂沉淀蛋白质：;（二）电泳：;电泳;自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。

2.区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进行电泳，不同组分形成带状区域。

（1）纸上电泳：用滤纸作支持物。

（2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。

;1）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。;等电聚焦电泳：当蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不再移动。;SDSPAGE中SDS的作用：

阴离子去污剂，变性，蛋白质伸展态

屏蔽蛋白质的电荷，都带负电荷

使得蛋白质的形状趋于一致;（三）层析：;凝胶过滤分离蛋白质;（四）超速离心：;蛋白质相对分子量在10000-1000000之间。测定分子量的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。;蛋白质分子量（M）与沉降系数（s）的关系