教学课件：第三章-抗体制药(二).ppt

五、抗体诊断试剂*抗原和抗体的特异性结合在体内和体外都可呈现某种反应。01在体内可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，可作为药物用于治疗；02在体外可发生凝集或沉淀等反应，可用已知抗体来鉴定抗原，作病原学的诊断和血型测定。03血清学鉴定用的抗体类试剂22%导向诊断药物40%免疫标记技术用的抗体类试剂38%三类：血清学鉴定是指用已知抗体来鉴定未知的抗原型，主要用于疾病的病原菌的诊断和血型鉴定。常用凝集反应。还可以检查出某些还尚无临床表现的极小肿瘤病灶，检测心肌梗死的位置和面积，为有效治疗提供方便。用单克隆抗体可以检测出多种病毒中非常细微的株间差异；鉴定细菌的种型和亚种，这是传统血清法或动物免疫幅所做不到的，而且诊断异常准确。诊断血清01分群血清02分型血清03因子血清04沙门氏菌属诊断血清05志贺氏菌属诊断血清06病原性大肠埃希氏菌诊断血清07制备细菌抗原：细菌接种、培养、收集菌苔、制成菌液；01免疫动物和制备抗体血清：动物有家兔、马、羊、豚鼠；免疫途径：静脉、腹腔、皮下。接种次数3～7次，每次间隔3～4天，末次注射后6～8天取血样测效价，达到要求，即可采血，离心分离血清。01诊断血清的诊断方法：直接凝集反应01乙型肝炎病毒表面抗原的反向被动血凝诊断试剂*此时检测尿液中的HCG，就可确定是否怀孕。妇女妊娠后，血液和尿液中的HCG（humanchorionicgonadotrophin，人绒毛膜促性腺激素）含量增高，在3个月内达到高峰。抗ABO血型系统血清*按照人红细胞带有的A或B种凝集原，可将血型分为A、B、AB和O型4种。ABO血型抗血清的制备：1、人源性ABO血型抗血清是采集健康献血人的血液，凝固后，置4度过夜，使冷抗体吸附在血块上一起除掉。2、动物源性ABO血型抗血清是用人血型物质A和B免疫马得到的。3、单克隆抗体是应用B淋巴细胞杂交瘤技术生产抗A或抗B血清。血型鉴定的方法：玻片直接凝集法。免疫标记技术用的抗体类试剂*给抗体标记放射性核素、荧光素或酶活性，能将抗原抗体反应放大，使常规不能观察的反应得以显现，可对微量抗体进行定性定量测定，灵敏度高。01结合显微镜技术，还可对抗原物质作出组织内或细胞内的定位测定。02除临床诊断外，还能为探讨发病机制提供手段。03荧光抗体诊断试剂*是用荧光色素，如异硫氰酸荧光素（FITC）、罗丹明（RB200）、藻红素（PE）等标记抗体蛋白，即成荧光抗体。01用荧光抗体浸染含有抗原物质的组织切片或细胞，荧光抗体就与抗原结合，在显微镜下成为发光的可视物，从而达到诊断和定位的目的。01用酶标记抗体来检测抗原，有免疫酶染法和酶免疫测定。目前有：HBsAg酶标诊断试剂、HBeAg酶标诊断试剂、HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶标诊断试剂、测定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶标抗体诊断试剂、甲胎蛋白（AFP）酶标抗体诊断试剂、癌胚抗原（CEA）的酶标抗体诊断试剂。放射免疫用抗体诊断试剂*放射免疫技术是将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来建立的检测技术。能测出ng/ml，甚至pg/ml水平的微量抗原物质。导向诊断药物*以抗体为载体的导向诊断药物的研究比导向治疗更接近临床应用阶段。放射性免疫显像的优点：在体内有确切定位肿瘤的作用；在体内可检出0.5厘米大小的病灶；小分子抗体容易到达肿瘤部位；抗体在肿瘤部位可保留6-9日；能观察抗体在血中的半衰期和可能出现的不良反应。12六、抗体治疗药物*以抗体为载体的导向治疗药物研究已有20多年的历史，已制备出百余种单克隆抗体，鉴定出数十种与肿瘤有关的抗原，受试病人超过数千例。在治疗药物中，单克隆抗体与毒素的偶联物治疗淋巴瘤效果最佳，但有效率仅30％。原因：抗体相对分子量大，穿透力低，不能达到靶部位或摄取量低；鼠源性抗体的排斥反应。但治疗用的制剂尚没有一种达到商品化的程度。目前的客观现实：研究进展迅速，但未达到常规治疗的应用阶段。12345*第三章抗体制药（二）3学时近年来，在scFv（单链抗体）的基础上，可以把两个或两个以上的scFv重组在一起，由此可制备成多价小分子抗体即微型抗体（简称多价微抗）。包括双链抗体（diabody），三链抗体（triabody），微型抗体（minibody）及四链抗体（tetrabody）。多功能抗体及其制备*双链抗体制备方法：化学交联法、粘性蛋白结构域融合法和接头长度控制法。微型抗体：通过基因工程手段采用不同的接头把单链抗体（VL-VH)的VH结构域与IG的CH3结构域融合，形成V