DB22T 2260-2015 鹿鞭鉴定方法 PCR 法.docxVIP

ICS67.120B45

备案号：44981-2015DB22吉林省地方标准

DB22/T2260—2015

鹿鞭鉴定方法PCR法

IdentificationofSikaDeerandWapitiPizzles----PolymeraseChainReactionMethod

2015-02-01发布2015-03-01实施

吉林省质量技术监督局发布

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DB22/T2260—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：中国农业科学院特产研究所。

本标准主要起草人：邢秀梅、吴琼、杨福合、苏伟林、邵元臣、查代明、荣敏、刘华淼、徐佳萍、杨颖、涂剑锋、张铁涛。

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DB22/T2260—2015

鹿鞭鉴定方法PCR法

1范围

本标准规定了梅花鹿鞭、马鹿鞭（塔河马鹿除外）的PCR鉴定方法。本标准适用于梅花鹿鞭、马鹿鞭（塔河马鹿除外）的真伪鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

鹿鞭pizzle

梅花鹿、马鹿的外生殖器，包括阴茎及睾丸。

4原理

针对梅花鹿、马鹿线粒体DNA（mtDNA）的D-loop区特异性基因序列设计引物，应用聚合酶链反应（PCR）技术扩增特异性DNA片段，根据是否扩增出特异性片段对鹿鞭进行鉴定。

5试剂和材料

除非另有说明，所有的化学试剂均为分析纯。实验用水规格应符合GB/T6882中二级水的规定。5.1引物

上游引物：5’-CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’下游引物：5’-ATCTAGTGCTCGAATTAATGGTAC-3’

5.2试剂

5.2.1氯化钠（NaCl），CAS号7647-14-5。

5.2.2氯化镁（MgCl2·6H2O），CAS号7791-18-6。

5.2.3氢氧化钠（NaOH），CAS号1310-73-2。

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DB22/T2260—2015

5.2.4琼脂糖，CAS号9012-36-6。

5.2.5三羟甲基氨基甲烷（Tris），CAS号77-86-1。

5.2.6十二烷基磺酸钠（SDS），CAS号2386-53-0。

5.2.7乙二胺四乙酸二钠盐（Na2EDTA），CAS号15708-41-5。

5.2.8盐酸（HCl），CAS号7647-01-0。

5.2.9三氯甲烷（氯仿），CAS号67-66-3。5.2.10冰乙酸，CAS号64-19-7。

5.2.11无水乙醇，CAS号64-17-5。

5.2.12Tris饱和酚，CAS号108-95-2。

5.2.13TritonX-100，CAS号9036-19-5。

5.2.1475%乙醇。

5.2.15酚﹕氯仿混合液（体积比1﹕1）：Tris饱和酚、氯仿等体积混合，置于棕色瓶中，4℃保存。

5.2.16dNTP溶液（市售）：含dATP、dTTP、dCTP、dGTP，各2.5mmol/L。

5.2.1710×PCRBuffer缓冲液（不含氯化镁）（市售）：100mmol/LKCl，160mmol/L(NH4)2SO4，

20mmol/LMgSO4，200mmol/LTris-HCl(pH8.8)，1%TritonX-100，1mg/mLBSA。5.2.18TaqDNA聚合酶（5U/μL）。

5.2.19溴化乙锭（10mg/ml）：称量100mg溴化乙锭溶解于10mL水中，然后分装成1mL/份，4℃避光保存。

5.2.2010mMTris：称量24.22gTris溶于160ml蒸馏水中，加浓HCL调pH至8.0，最后定容至

200mL,常温保存。

5.2.210.5mol/lEDTA：称量186.1gED