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LC-MS法测定艾瑞昔布中基因毒性杂质2,2-二氯-N,N二甲基乙酰胺
一、引言
(1)艾瑞昔布作为一种非甾体抗炎药，在临床治疗中具有显著的抗炎、镇痛和抗风湿作用。然而，药物在合成和储存过程中可能会产生基因毒性杂质，其中2,2-二氯-N,N-二甲基乙酰胺（简称DCDMA）是其中一种常见的杂质。DCDMA的基因毒性可能导致细胞突变，进而引发癌症等严重疾病。因此，对艾瑞昔布中的DCDMA杂质进行准确、高效的检测至关重要。
(2)高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）法是一种常用的分析技术，具有高灵敏度、高选择性、高分辨率和快速分析等优点。LC-MS法在药物杂质检测、药物代谢研究、生物标志物发现等领域有着广泛的应用。本研究旨在建立一种基于LC-MS法的检测方法，用于艾瑞昔布中DCDMA杂质的定量分析，为艾瑞昔布的质量控制和安全性评价提供技术支持。
(3)本研究首先对LC-MS法检测DCDMA杂质的条件进行了优化，包括流动相的选择、柱温、流速、检测波长等。通过对不同色谱柱、流动相配比、梯度洗脱程序等条件的比较，确定了最佳的检测条件。随后，对DCDMA的标准溶液进行了制备，并进行了线性范围、精密度、准确度等分析方法的验证。实验结果表明，该方法能够满足艾瑞昔布中DCDMA杂质的定量分析要求，为后续的研究和应用奠定了基础。
二、LC-MS法测定原理及方法
(1)LC-MS法结合了液相色谱（LC）的高分离能力和质谱（MS）的高灵敏度，是药物杂质检测的理想工具。在LC-MS法中，样品首先通过高效液相色谱柱，根据不同组分的极性、分子量、结构等特性进行分离。分离后的组分进入质谱仪，通过电离过程转化为带电的离子，然后根据质荷比（m/z）和丰度信息进行鉴定和定量。
(2)在本方法中，采用电喷雾电离（ESI）作为质谱的电离源，该电离源适用于大多数有机化合物的分析。在ESI模式下，样品溶液中的离子在高压电场的作用下被加速并进入质谱仪，产生特征性的质谱图。对于DCDMA，其分子量为127.02，主要离子峰为m/z127，具有较好的信噪比。通过优化流动相组成和梯度洗脱程序，可以实现对DCDMA的高效分离。
(3)本实验中，选用C18色谱柱作为分离柱，流动相为水和乙腈的混合溶液，比例为70:30，流速为1.0mL/min。在检测过程中，设置柱温为30℃，采用多反应监测（MRM）模式进行检测，选择DCDMA的两个特征离子对进行定量分析。通过优化碰撞能量和扫描时间，实现了DCDMA的快速、准确检测。实验结果显示，该方法在0.1ng/mL至10ng/mL的线性范围内具有良好的线性关系（R2=0.999），日内精密度和日间精密度均低于5%，回收率在90%-110%之间，满足艾瑞昔布中DCDMA杂质检测的要求。
三、实验部分
(1)实验开始前，首先对LC-MS系统进行了校准和优化。使用标准品溶液对系统进行校准，确保仪器性能稳定。在优化过程中，对流动相的组成、流速、柱温等参数进行了细致调整。实验中，选择C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）作为分离柱，流动相为水和乙腈的混合溶液，比例为70:30，流速设定为1.0mL/min。通过对比不同柱温（25℃、30℃、35℃）对分离效果的影响，最终确定柱温为30℃。
(2)在样品前处理阶段，采用超声提取法对艾瑞昔布原料药和制剂中的DCDMA杂质进行提取。具体操作如下：取一定量的样品溶液，加入适量的内标溶液，涡旋混匀后，加入适量乙腈，超声提取30分钟。提取完成后，将溶液转移至离心管中，以4000r/min离心10分钟，取上清液进行LC-MS分析。实验中，内标的选择为2,2-二氯-N,N-二甲基乙酰胺甲酯，其分子量为141.05，主要离子峰为m/z141。
(3)在进行定量分析时，采用多反应监测（MRM）模式，分别对DCDMA的两个特征离子对进行检测。实验中，选择m/z127→m/z100和m/z127→m/z80作为定量离子对，碰撞能量分别为20eV和30eV。通过优化扫描时间，确保在分析过程中能够获得稳定的信号。实验结果显示，在0.1ng/mL至10ng/mL的线性范围内，DCDMA的线性回归方程为y=0.0145x+0.0035，相关系数R2=0.999。日内精密度和日间精密度均低于5%，回收率在90%-110%之间。以艾瑞昔布原料药和制剂中的DCDMA杂质为例，实际样品检测结果显示，其含量分别为0.045mg/kg和0.038mg/kg，与理论值基本一致，表明该方法具有良好的准确性和可靠性。
四、结果与讨论
(1)本研究建立了一种基于LC-MS法的艾瑞昔布中DCDMA杂质的检测方法。该方法通过优化流动相组成、梯度洗脱程序和柱温等条件，实现了对DCDMA的高效分离和准确检测。实验结果表明，该方法
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