2025年分离纯化蛋白质的方法及原理.pdfVIP

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

分离纯化蛋白质的方法及原理

（二）利用溶解度差别

影响蛋白质溶解度的外部因素有：

1、溶液的pH；

2、离子强度；

3、介电常数；

4、温度。但在同一的特定外部条件下，不同蛋白质具有不同的溶

解度。

1、等电点沉淀：

原理：

蛋白质处于等电点时，其净电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间

没有静电斥力而趋于聚集沉淀。因此在其他条件相同时，他的溶解度

达到最低点。在等电点之上或者之下时，蛋白质分子携带同种符号的

净电荷而互相排斥，阻止了单个分子聚集成沉淀，因此溶解度较大。

不同蛋白质具有不同的等电点，利用蛋白质在等电点时的溶解度最低

的原理，可以把蛋白质混合物分开。当pH被调到蛋白质混合物中其中

一种蛋白质的等电点时，这种蛋白质大部分和全部被沉淀下来，那些

等电点高于或低于该pH的蛋白质则仍留在溶液中。这样沉淀出来的蛋

白质保持着天然的构象，能重新溶解于适当的pH和一定浓度的盐溶液

中。

5、盐析与盐溶：

原理：

低浓度时，中性盐可以增加蛋白质溶解度这种现象称为盐溶.盐溶

作用主要是由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电层使蛋白质分

子彼此排斥，而蛋白质与水分子之间的相互作用却加强，因而溶解度

增高。球蛋白溶液在透析过程中往往沉淀析出，这就是因为透析除去

了盐类离子，使蛋白质分子之间的相互吸引增加，引起蛋白质分子的

凝集并沉淀。当溶液的离子强度增加到一定程度时，蛋白质溶解程度

开始下降。当离子强度增加到足够高时，例如饱和或半饱和程度，很

勿以恶小而为之，勿以善小而不为。——刘备

多蛋白质可以从水中沉淀出来，这种现象称为盐析。盐析作用主要是

由于大量中性盐的加入使水的活度降低，原来溶液中的大部分甚至全

部的

自由水转变为盐离子的水化水。此时那些被迫与蛋白质表面的疏

水集团接触并掩盖他们的水分子成为下一步最自由的可利用的水分子，

因此被移去以溶剂化盐离子，留下暴露出来的疏水基团。蛋白质疏水

表面进一步暴露，由于疏水作用蛋白质聚集而沉淀。

盐析沉淀的蛋白质保持着他的天然构象，能再溶解。盐析的中性

盐以硫酸铵为最佳，在水中的溶解度很高，而溶解度的温度系数较低。

3、有机溶剂分级分离法：

与水互溶的有机溶剂（甲醇、乙醇和丙酮等）能使蛋白质在水中

的溶解度显著降低。在室温下有机溶剂会引起蛋白质变性，如果预先

将有机溶剂冷却到-40°C以下，然后在不断搅拌下逐滴加入有机溶剂，

以防局部浓度过高，那么变性可以得到很大程度缓解。蛋白质在有机

溶剂中的溶解度也随温度、pH和离子强度而变化。在一定温度、pH

和离子强度条件下，引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同，因此控

制有机溶剂浓度也可以分

离纯化蛋白质。

有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因之一是改变了介质的介电常

数。有机溶剂的加入使水溶液的介电常数降低。介电常数的降低将增

加两个相反电荷之间的吸引力。蛋白质分子表面可解离基团的离子化

程度减弱，水化程度降低，因此促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。

水溶性非离子聚合物如聚乙二醇与蛋白质亲水集团发生相互作用

并在空间上阻碍了蛋白质与水相接近。蛋白质在聚乙二