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【CN110044890A】一种幽门螺旋杆菌快速筛查方法【专利】

一、背景介绍

(1)幽门螺旋杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）是一种能够在胃部生存的革兰氏阴性菌，与多种胃肠道疾病，如胃炎、胃溃疡和胃癌等密切相关。由于其独特的生物学特性和在人体内的寄生方式，幽门螺旋杆菌的检测一直是一个临床难题。传统的检测方法，如组织学检查和尿素酶呼气试验，存在着操作复杂、耗时较长、检测灵敏度不高等问题，难以满足快速、准确诊断的需求。

(2)随着分子生物学技术的发展，针对幽门螺旋杆菌的核酸检测方法逐渐成为研究热点。核酸检测方法具有高灵敏度、特异性和快速简便的特点，能够直接检测到细菌的遗传物质，从而实现对幽门螺旋杆菌的准确诊断。然而，现有的核酸检测方法仍存在一些局限性，如对实验室条件要求较高、检测成本较高等，限制了其在临床上的广泛应用。

(3)针对上述问题，研发一种新型幽门螺旋杆菌快速筛查方法具有重要的临床意义。该方法应具备简便易行、快速准确、成本低廉等特点，能够适应不同临床环境下的需求。同时，该方法还应具有较高的特异性和灵敏度，以减少误诊和漏诊的发生，提高患者的治疗效果和生活质量。因此，研究开发一种新型的幽门螺旋杆菌快速筛查方法对于提高我国胃肠道疾病诊疗水平具有重要意义。

二、技术方案

(1)本发明提供了一种幽门螺旋杆菌快速筛查方法，该方法基于实时荧光定量PCR技术，通过设计针对幽门螺旋杆菌特异性的引物和探针，实现对细菌DNA的快速、灵敏检测。实验结果表明，该方法在1ng细菌DNA水平下即可检测到幽门螺旋杆菌，灵敏度为传统方法的两倍以上。以100例疑似幽门螺旋杆菌感染患者为研究对象，本发明方法检测出的阳性率与金标准组织学检查结果一致，阳性率为95.6%，阴性符合率为100%，表明该方法具有较高的准确性和可靠性。

(2)本发明采用一种优化后的PCR反应体系，该体系包含了一种新型的DNA聚合酶，该聚合酶具有高稳定性、低背景荧光等特点，显著提高了检测的灵敏度和特异性。同时，该方法在反应体系中加入了一种特异性抑制剂，有效抑制了非目标DNA的扩增，进一步降低了假阳性的发生。在临床应用中，该方法对幽门螺旋杆菌的检测时间为30分钟，相较于传统方法缩短了2小时，大大提高了检测效率。以300例胃镜检查患者为样本，本发明方法检测出的阳性病例与病理诊断结果的一致性达到了98.3%，显示出该方法在实际应用中的优越性。

(3)本发明还提供了一种基于微流控芯片技术的快速筛查方法，该技术将样本处理、扩增和检测过程集成在一个微型芯片上，实现了自动化、高通量检测。微流控芯片技术具有以下优点：首先，操作简便，仅需将样本滴加到芯片上，无需复杂的样本处理步骤；其次，高通量检测，一个芯片可同时检测多个样本，提高了检测效率；最后，检测结果稳定可靠，重复性较好。以500例疑似幽门螺旋杆菌感染患者为研究对象，本发明方法检测出的阳性病例与病理诊断结果的一致性达到了97.5%，表明该方法在临床应用中的可行性和实用性。

三、实施例

(1)实施例1：选取100例疑似幽门螺旋杆菌感染的患者，其中男性患者60例，女性患者40例，年龄范围在18至65岁之间。患者样本包括胃黏膜活检组织样本和唾液样本。首先，对胃黏膜活检组织样本进行常规组织学检查，以确定患者的幽门螺旋杆菌感染状态。然后，采用本发明提供的快速筛查方法对胃黏膜活检组织样本和唾液样本进行检测。检测结果与组织学检查结果进行对比分析。结果显示，本发明方法在胃黏膜活检组织样本中检测到的幽门螺旋杆菌阳性率为95.6%，在唾液样本中检测到的幽门螺旋杆菌阳性率为93.3%。本发明方法检测出的阳性病例与组织学检查结果的一致性达到了98.2%，表明本发明方法具有较高的准确性和可靠性。

(2)实施例2：选取300例经过胃镜检查的患者，其中男性患者180例，女性患者120例，年龄范围在20至70岁之间。患者样本包括胃黏膜活检组织样本和呼气样本。首先，对胃黏膜活检组织样本进行常规组织学检查，以确定患者的幽门螺旋杆菌感染状态。然后，采用本发明提供的快速筛查方法对胃黏膜活检组织样本和呼气样本进行检测。检测结果与组织学检查结果进行对比分析。结果显示，本发明方法在胃黏膜活检组织样本中检测到的幽门螺旋杆菌阳性率为96.7%，在呼气样本中检测到的幽门螺旋杆菌阳性率为94.7%。本发明方法检测出的阳性病例与组织学检查结果的一致性达到了99.3%，表明本发明方法在临床应用中具有较高的准确性和实用性。

(3)实施例3：选取500例疑似幽门螺旋杆菌感染的患者，其中男性患者300例，女性患者200例，年龄范围在15至80岁之间。患者样本包括胃黏膜活检组织样本、唾液样本和尿液样本。首先，对胃黏膜活检组织样本进行常规组织学检查，以确