3.2 基因工程的基本操作程序（第1课时）（分层作业）（解析版）.docxVIP

第2节基因工程的基本操作程序

1．将两对PCR引物作特殊的设计，外侧两个引物大小为25bp，复性温度较高（68℃）；内侧两个引物大小为17bp，复性温度较低（46℃）。通过控制复性温度（68℃）使外侧引物先行扩增，经过20～30次循环后（第一轮PCR结束），再降低复性温度（46℃）使内侧引物以第一轮PCR产物为模板进行再次扩增，整个过程被称为巢式PCR，该技术更适用于DNA含量低的待扩增的样品。两轮PCR反应均在一个PCR管中进行。下列说法错误的是（????）

A．与常规PCR技术相比，两套引物的使用提高了扩增的特异性和敏感性

B．第二轮PCR反应能否进行，是对第一轮PCR反应正确性的鉴定

C．复性温度与引物长度成正相关

D．在一个PCR管中进行两轮PCR反应均使用了相同的模板

【答案】D

【分析】PCR扩增：目的基因DNA受热变性后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此循环多次。

【详解】A、巢式PCR中，如果第一次扩增产生了错误片段，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低，提高了扩增的特异性和敏感性，A正确；

B、第二轮PCR使内侧引物以第一轮PCR产物为模板进行再次扩增，第二轮PCR反应能否进行，是对第一轮PCR反应正确性的鉴定，B正确；

C、外侧两个引物大小为25bp，复性温度较高（68℃）；内侧两个引物大小为17bp，复性温度较低（46℃），复性温度与引物长度成正相关，C正确；

D、第一轮PCR使用一开始投放的模板DNA，第二轮以第一轮PCR产物为模板进行再次扩增，D错误。

故选D。

2．抗原检测阴性但临床仍然高度怀疑甲型流感病毒感染的患者，医生会建议做核酸检测。但等待核酸检测出报告需较长时间，该检测实际采用的技术是逆转录PCR，病毒刺突蛋白编码序列如下图所示，科研人员为该PCR分别设计了引物A（5-CCC…TGTATGGGGTTCTAA-3）和引物B（5-ACG…ACT①TTA②CTGGTGCAG-3），已知引物A中ATG对应起始密码子，引物B中TTA对应终止密码子，标记基因可以插入刺突蛋白编码序列的首端或末端。DNA编码链为转录时所用模板链的互补链。下列叙述正确的是（????）

A．获取甲流病毒的遗传物质后直接进行PCR扩增以节省出报告时间

B．扩增后的基因产物中引物A所在的子链是该基因的编码链

C．若标记基因需要插入引物B的①或②位置中则应选择①位置

D．PCR扩增产物经电泳后在琼脂糖凝胶中将出现宽度不同的5个条带

【答案】B

【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5端自3端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。PCR反应过程是：变性→复性→延伸。

【详解】A、获取甲流病毒的遗传物质后先逆转录为DNA后在进行扩增，A错误；

B、已知引物A中ATG对应起始密码子，引物A的序列是5-CCC…TGTATGGGGTTCTAA-3，因此扩增后的基因产物中引物A所在的子链是该基因的编码链，B正确；

C、引物B中TTA对应终止密码子，所以标记基因需要插入引物B的②位置，C错误；

D、PCR扩增产物经电泳后在琼脂糖凝胶中将出现宽度不同的3个条带，D错误。

故选B。

3．绿萝是一种常见的观叶植物，几乎没有开花的记录。EaLFY是决定绿萝开花的关键基因。在研究绿萝不开花原因的实验中，科学家将长势相同的绿萝均匀地分为六组，三组不施加赤霉素（-GA3，不开花），另外三组施加赤霉素（+GA3，开花），然后分别取绿萝的mRNA进行RT-PCR处理，得到下图电泳结果。已知RT-PCR技术是将RNA的反转录（RT）和DNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。下列叙述错误的是（????）

??

A．RT-PCR需要逆转录酶、RNA模板、DNA聚合酶、脱氧核苷酸、引物和能量等条件

B．绿萝EaLFY基因突变导致无法正常表达

C．据上述实验可知，绿萝无法开花的原因可能是自身赤霉素合成障碍

D．赤霉素的合成受基因控制，也会影响基因的表达过程

【答案】B

【分析】PCR技术：①概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术；②原理：DNA复制；③条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；④方式：以指数的方式扩增，即约2n；⑤过程：高温变性、低温复性、中温延伸。

【详解】A、PCR过程主要需要DNA聚合酶，DNA模板，能量，游离的脱氧核苷酸，引物，结合逆转录过程，RT-PCR