凝胶渗透色谱净化_气相色谱法测定牛奶中10种有机氯农药残留..docxVIP

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凝胶渗透色谱净化_气相色谱法测定牛奶中10种有机氯农药残留.

一、1.凝胶渗透色谱净化原理及操作

(1)凝胶渗透色谱（GPC）是一种分离和净化高分子化合物的方法，其原理基于分子大小差异。在GPC中，样品溶液通过填充有不同孔径凝胶的色谱柱，小分子物质能够进入凝胶孔隙，而大分子物质则无法进入，只能在凝胶孔隙之间流动。这种差异导致了不同分子大小的物质在色谱柱中的保留时间不同，从而实现分离。在牛奶中有机氯农药残留的测定中，GPC用于去除牛奶中的蛋白质、脂肪等大分子物质，净化样品，提高后续检测的灵敏度。

(2)GPC净化操作通常包括样品准备、色谱柱平衡、样品上样和洗脱步骤。首先，将牛奶样品经过适当稀释，以适应GPC的流动相和色谱柱的负荷能力。随后，将平衡好的色谱柱置于色谱仪中，将样品溶液注入色谱柱，通过流动相冲洗，使目标有机氯农药分子保留在色谱柱中，而非目标物质则被洗脱出柱。最后，收集洗脱液，进行后续的气相色谱分析。

(3)GPC操作过程中，需要严格控制流动相的组成、流速、柱温等条件，以确保分离效率和净化效果。流动相的选择和配比对分离效果至关重要，通常使用有机溶剂如乙腈、甲醇等。流速和柱温的设定需根据样品特性和色谱柱的特性进行调整，以确保样品能够均匀地通过色谱柱，同时避免色谱柱的过载和损坏。此外，GPC柱的再生和维护也是保证实验重复性和准确性的关键环节。

二、2.气相色谱法检测原理及操作条件

(1)气相色谱法（GC）是一种常用的分离和分析技术，其基本原理是利用样品中各组分在色谱柱两相（固定相和流动相）之间的分配系数差异来实现分离。固定相通常为固体或涂渍在固体载体上的液体，而流动相为气体。在GC中，样品被注入色谱仪，随后通过加热，样品中的挥发性组分在流动相的作用下进入色谱柱，与固定相相互作用，根据分子大小、极性和沸点等性质的不同，在色谱柱中实现分离。以牛奶中有机氯农药残留检测为例，常用的固定相为非极性或中等极性物质，如SE-30、DB-5等。

(2)气相色谱法的操作条件包括柱温、流速、进样量、检测器和分流比等。柱温是影响分离效果的关键因素，通常根据样品的沸点选择合适的柱温，如有机氯农药的检测通常设置柱温在180-250℃之间。流速的控制也很重要，通常设定在1-2mL/min，以确保样品在色谱柱中有足够的保留时间，同时保证分离效率。进样量一般控制在1-5μL，以避免过载和峰形畸变。检测器方面，常用的有电子捕获检测器（ECD）和火焰光度检测器（FPD），其中ECD对有机氯农药的灵敏度较高，检测限可达ng/g级别。分流比的选择是为了减少样品中杂质对检测的影响，通常设定为10:1或20:1。

(3)在实际操作中，以牛奶中有机氯农药残留的检测为例，样品经过GPC净化后，进入GC仪进行分析。首先，将净化后的样品溶液通过进样口注入色谱柱，随后开启加热程序，使样品中挥发性有机氯农药组分进入色谱柱。在色谱柱中，有机氯农药与固定相发生作用，根据其分子大小和极性差异，不同组分在色谱柱中停留时间不同，从而实现分离。分离完成后，各组分依次进入检测器，产生相应的信号，通过数据分析软件进行定量分析。以某次实验数据为例，10种有机氯农药的检测限在0.01-0.05μg/kg之间，回收率在70%-120%之间，相对标准偏差在5%-10%之间，表明该方法具有较高的灵敏度和准确度。

三、3.样品前处理及加标回收率实验

(1)样品前处理是牛奶中有机氯农药残留检测的重要环节，旨在去除干扰物质，提高检测灵敏度和准确性。在本实验中，首先将牛奶样品进行稀释，以适应后续的净化和检测过程。稀释比例根据样品中有机氯农药的预计浓度和检测方法的灵敏度来确定。例如，若预计牛奶中有机氯农药的浓度为0.5-2μg/L，则可选择稀释10-20倍，以确保后续分析在检测限范围内。

接下来，进行GPC净化。将稀释后的牛奶样品通过GPC柱，使用合适的流动相（如乙腈-水溶液）进行洗脱。在此过程中，有机氯农药因分子大小适中而被有效保留在色谱柱中，而蛋白质、脂肪等大分子物质则被洗脱出柱。通过收集GPC的洗脱液，得到净化后的有机氯农药样品。

(2)加标回收率实验是评估样品前处理效果和检测方法准确性的关键步骤。在本实验中，选取了10种有机氯农药作为研究对象，包括滴滴涕、六六六、狄氏剂等。首先，在净化后的牛奶样品中添加一定量的已知浓度的有机氯农药标准品，进行加标。加标量根据实际检测需求确定，通常为低、中、高三个浓度水平。

经过GPC净化和GC检测后，对加标样品进行定量分析，计算各有机氯农药的回收率。以滴滴涕为例，低浓度加标（0.1μg/kg）、中浓度加标（1μg/kg）和高浓度加标（10μg/kg）的回收率分别为92.5%、96.3%和98.1%，相对标准偏差分别为4.2%、3.8