《单克隆抗体制备》课件.ppt

**********************单克隆抗体制备单克隆抗体是从一种特定的单个B细胞分化而来的一组高度特异性和亲和力的同种抗体。它们在疾病诊断、治疗和生物医学研究中广泛应用。单克隆抗体的概念和特点单克隆抗体的定义单克隆抗体是由单一克隆细胞株产生的、针对特定抗原决定基团的同种抗体。它们具有高度特异性和亲和力。单克隆抗体的结构单克隆抗体由两条重链和两条轻链组成,呈Y字形结构。重链和轻链上的可变区决定了其特异性。单克隆抗体的特点单克隆抗体具有高度特异性、批量生产、纯度高、性能稳定等优点,广泛应用于诊断、治疗和基础研究。单克隆抗体的制备原理1抗原刺激将特定抗原注射到小鼠体内,刺激其产生针对该抗原的抗体。2B细胞分离从小鼠脾脏分离出产生目标抗体的浆细胞。3细胞融合将分离的浆细胞与骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞。免疫细胞融合技术1免疫原刺激通过免疫原刺激动物产生特异性抗体2脾细胞分离从免疫动物中分离出免疫原特异性B细胞3细胞融合将脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合4杂交瘤筛选选择并克隆具有目标特异性的杂交瘤细胞免疫细胞融合技术是制备单克隆抗体的核心步骤。通过免疫动物产生目标特异性抗体，分离出高亲和力的B细胞，与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。经过严格筛选，可获得稳定分泌目标抗体的单克隆杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞的培养与筛选1培养基优化定制适合杂交瘤细胞生长的培养基配方2单克隆细胞获取通过限释法或细胞单克隆化获得单一抗体产生的杂交瘤细胞株3抗体活性检测采用ELISA或WesternBlot等方法对杂交瘤细胞分泌的抗体进行鉴定4大规模扩增选择高活性抗体分泌的杂交瘤株进行大规模培养5冻存保存将优秀的杂交瘤细胞株进行冻存,保证长期供应杂交瘤细胞的培养与筛选是单克隆抗体制备的关键步骤。通过定制培养基、获取单克隆细胞、检测抗体活性、大规模扩增和冻存保存等一系列操作,可以筛选出产量高、活性强的优质杂交瘤株,为后续的工业化生产奠定基础。单克隆抗体的纯化与鉴定亲和层析纯化利用单克隆抗体与抗原的特异性结合,通过亲和层析柱可以从杂交瘤细胞培养液中高效分离纯化单克隆抗体。电泳鉴定采用SDS电泳技术可以检测单克隆抗体的分子量和纯度,确保其结构完整性。免疫学分析ELISA、WesternBlot等免疫学方法用于评估单克隆抗体的特异性和亲和力,确保其生物学活性。单克隆抗体的应用领域临床诊断单克隆抗体可用于疾病检测和诊断,广泛应用于免疫分析技术,如ELISA、免疫层析、免疫组化等。生物治疗单克隆抗体可用于靶向药物的开发,治疗肿瘤、自身免疫性疾病等。已有多种单抗药物获批上市。科学研究单克隆抗体在细胞生物学、分子生物学、免疫学等领域广泛应用,可用于蛋白质纯化、信号通路研究等。工业生产单抗技术应用于制药、食品、化工等行业,用于蛋白质分离纯化、质量检测等。免疫学基础知识复习免疫系统概述免疫系统是人体防御和保护自身的复杂防御机制,包括先天性免疫和适应性免疫。抗原识别免疫系统通过识别抗原来启动免疫应答,从而清除外来入侵物质或感染的细胞。免疫细胞作用免疫细胞包括T细胞、B细胞和巨噬细胞等,它们各司其职发挥免疫功能。抗体作用抗体是免疫系统产生的蛋白质,可特异性识别和中和抗原,协助免疫细胞清除病原体。B细胞激活与分化过程抗原识别B细胞与抗原接触并识别后被激活。细胞内信号传导激活的B细胞内部启动一系列信号传导级联反应。细胞增殖分化激活的B细胞大量增殖并分化为浆细胞或记忆B细胞。抗原抗体反应的基本特征1特异性抗原与抗体之间存在高度的特异性识别，每种抗体都能与特定的抗原结合。2亲和力抗原与抗体之间的结合强度称为亲和力，亲和力的高低影响反应的强弱。3可逆性抗原抗体反应是一个可逆的动态过程，在一定条件下可以解离。4多价性抗体分子可同时与多个抗原决定基结合，形成牢固的抗原抗体复合物。抗体亲和力与亲和常数亲和力抗原与抗体之间的结合力强弱程度。高亲和力意味着两者结合更紧密。亲和常数反映抗原与抗体结合的稳定性和牢固程度。亲和常数越高,结合越稳定。这两个概念反映了抗体与特定抗原的结合特性。了解它们对于设计高效的免疫诊断和治疗技术很重要。杂交瘤技术的发展历程杂交瘤技术自1975年被发明以来，经历了近半个世纪的快速发展。从最初的概念论证到实际应用的工艺优化，这项技术在免疫学和药物研发领域发挥了重要作用。1发明立论1975年，凯斯勒和米尔斯提出了杂交瘤技术的概念和制备方法2技术优化通过不断优化培养条件和筛选流程，提高了单抗产量和质量3应用拓展单抗广泛应