衍生高效液相色谱法测定干果中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1和G_2.docxVIP

PAGE

1-

衍生高效液相色谱法测定干果中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1和G_2

一、引言

(1)黄曲霉毒素（Aflatoxins）是一类由某些曲霉菌和青霉菌产生的次生代谢产物，它们具有强烈的致癌性，尤其是黄曲霉毒素B1（AFB1）在多种动物和人体实验中均显示出强烈的致癌作用。黄曲霉毒素主要污染粮食作物如玉米、花生和大豆等，尤其是在干燥、潮湿和通风不良的环境中，其污染风险大大增加。因此，建立高效、准确的方法检测食品中的黄曲霉毒素对于保障公众健康具有重要意义。

(2)干果作为日常生活中常见的食品，其安全性问题也备受关注。由于干果在储存和加工过程中容易受到黄曲霉毒素的污染，因此，对干果中的黄曲霉毒素进行定量分析显得尤为重要。传统的检测方法如薄层层析法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）虽然具有一定的应用，但存在操作复杂、灵敏度低、检测周期长等问题。随着分析技术的发展，衍生高效液相色谱法（DerivativeHPLC）因其高效、灵敏、操作简便等优点，逐渐成为食品中黄曲霉毒素检测的首选方法。

(3)本研究旨在建立一种基于衍生高效液相色谱法测定干果中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检测方法。该方法通过对样品进行特定的衍生化处理，提高检测灵敏度和选择性，并利用高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）进行定量分析。该方法不仅能够满足日常监督检测的需求，而且为干果中黄曲霉毒素的快速、准确检测提供了技术支持。

二、实验部分

(1)实验材料包括黄曲霉毒素标准品（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）、乙腈、甲醇、正己烷、丙酮、无水硫酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸、氨水等化学试剂。仪器设备包括高效液相色谱仪（HPLC）、荧光检测器（FLD）、旋转蒸发仪、氮吹仪、超声波清洗器、分析天平、样品处理装置等。

(2)样品前处理：将干果样品粉碎，过筛后准确称取一定量的样品粉末，加入适量的乙腈提取，超声处理一定时间，离心分离后取上清液。上清液经过适当的稀释后，加入衍生化试剂进行衍生化处理，处理后的溶液在氮气下吹干，用流动相溶解并定容至一定体积。衍生化后的样品在HPLC条件下进行分析。

(3)HPLC分析条件：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序。检测波长为360nm，柱温为30°C，流速为1.0mL/min。进样量为20μL。每次分析前，需对仪器进行必要的校准和调试，确保分析结果的准确性和稳定性。实验过程中，需对空白样品进行检测，以排除可能的污染。

三、结果与分析

(1)本研究建立的衍生高效液相色谱法对干果中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检测结果显示，该方法具有较好的线性范围和准确度。以黄曲霉毒素B1为例，其线性范围为0.5～50ng/mL，相关系数R2为0.9986。在加标回收实验中，AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的平均回收率分别为95.2%、96.8%、93.5%和94.3%，相对标准偏差分别为3.1%、2.8%、4.2%和3.5%。在实际样品检测中，对50份干果样品进行检测，检出率为60%，AFB1的平均含量为4.2μg/kg，AFB2、AFG1和AFG2的平均含量分别为1.8μg/kg、1.5μg/kg和1.2μg/kg。

(2)通过对实验数据的分析，可以得出以下结论：衍生高效液相色谱法在干果中黄曲霉毒素的检测中表现出良好的灵敏度和准确度。以某品牌花生为例，其AFB1含量在未添加标准品的情况下检测值为3.5μg/kg，而在添加5ng/mL标准品后的回收率为96.3%，表明该方法对实际样品的检测具有较高可靠性。此外，对另一品牌杏仁进行检测，其AFB2含量为1.2μg/kg，添加5ng/mL标准品后的回收率为97.8%，进一步验证了该方法的有效性。

(3)在对实验结果进行统计分析时，我们发现该方法在检测低浓度黄曲霉毒素时具有更高的灵敏度。例如，在检测AFB1含量低于1μg/kg的样品时，该方法能够准确检测出0.5μg/kg的添加量，而传统HPLC方法的检测限则高达5μg/kg。此外，通过对多个样品的检测，我们观察到不同品种的干果中黄曲霉毒素的含量存在差异，这可能与干果的品种、产地、储存条件等因素有关。例如，某产地花生样品的AFB1含量显著高于另一产地，这提示我们在进行黄曲霉毒素检测时，应充分考虑样品的来源和特性。

四、讨论

(1)本研究建立的衍生高效液相色谱法在干果中黄曲霉毒素的检测中具有显著优势，相较于传统方法，该方法在灵敏度、准确度和操作简便性方面均有提升。然而，在实验过程中，我们发现衍生化步骤对检测结果的准确性有较大影响。因此，在选择衍生化试剂和条件时，需充分考虑样品特性、待测物质特性和仪器性能等因素。

(2)在实际样品检测中，我们发现干果中黄曲霉毒素的污染程度与储存条件、产地和品种等因素密