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高效液相色谱法测定花生中黄曲霉素的含量

一、引言

(1)黄曲霉素是一种由曲霉菌产生的真菌毒素，主要污染粮食、油料和坚果等食品。它在自然界中广泛存在，尤其在高湿、高温度的条件下容易滋生。黄曲霉素具有较强的毒性和致癌性，对人体健康构成严重威胁。因此，对食品中黄曲霉素的检测具有重要的食品安全意义。

(2)高效液相色谱法（HPLC）是一种分离和定量分析混合物中各组分的常用技术。该方法具有高效、快速、灵敏和准确等优点，广泛应用于食品、药品、环境监测等领域。近年来，随着色谱技术的不断发展，高效液相色谱法在食品中黄曲霉素的检测中得到了广泛应用。该方法通过使用合适的色谱柱、流动相和检测器，可以对黄曲霉素进行高效分离和准确测定。

(3)花生作为一种常见的油料作物，在我国有着广泛的种植和消费。然而，花生在储存和加工过程中，很容易受到黄曲霉素的污染。因此，对花生中黄曲霉素含量的检测显得尤为重要。本研究旨在通过高效液相色谱法对花生中黄曲霉素的含量进行测定，为保障花生食品安全提供科学依据。

二、高效液相色谱法测定花生中黄曲霉素的原理与步骤

(1)高效液相色谱法测定花生中黄曲霉素的原理基于黄曲霉素与其他物质在色谱柱上的分离特性。黄曲霉素是一种极性较强的化合物，通常采用反相高效液相色谱法进行分离。在反相色谱中，流动相为水相或水-有机相混合物，固定相为非极性或弱极性材料。通过调节流动相的组成、流速和柱温等条件，可以使黄曲霉素与样品中的其他物质实现有效分离。检测黄曲霉素的方法通常采用紫外检测器（UV），因为黄曲霉素在紫外光下具有特定的吸收峰。在测定过程中，样品首先经过适当的预处理，如提取、净化和浓缩，以提高检测的灵敏度和准确性。

(2)测定花生中黄曲霉素的步骤如下：首先，对花生样品进行粉碎和混匀，以确保样品的均匀性。然后，采用适当的溶剂进行提取，常用的提取溶剂有乙腈、甲醇等。提取液经过适当的离心或过滤后，去除杂质和悬浮物。接下来，对提取液进行净化处理，以去除干扰物质。常用的净化方法有固相萃取（SPE）、液-液萃取等。净化后的样品经过浓缩和复溶于适当的流动相中，以备上柱分析。色谱分析过程中，流动相的选择和梯度洗脱程序对黄曲霉素的分离至关重要。通常，流动相由水相和有机相组成，有机相的浓度会根据样品中黄曲霉素的含量和色谱柱的特性进行调整。色谱柱的选择也非常关键，常用的色谱柱有C18、C8等。最后，通过紫外检测器检测黄曲霉素的吸收峰，根据峰面积或峰高计算样品中黄曲霉素的含量。

(3)在高效液相色谱法测定花生中黄曲霉素的过程中，还应注意以下事项：一是样品的前处理，包括提取、净化和浓缩等步骤，这些步骤对黄曲霉素的检测结果有直接影响；二是色谱柱的选择和操作条件，如流速、柱温、流动相组成等，这些条件会影响黄曲霉素的分离效果；三是检测器的选择和优化，如紫外检测器的波长设置、灵敏度调整等，这些因素会影响到检测结果的准确性。此外，还需对实验结果进行质量控制，包括空白实验、标准曲线的制作、重复性实验等，以确保检测结果的可靠性和可重复性。

三、实验部分

(1)实验采用粉碎后的花生样品，每份样品质量为2.0g。首先，使用5mL乙腈进行提取，涡旋振荡2分钟，然后以4000r/min离心10分钟。取上清液，经C18固相萃取柱进行净化，使用3mL水和3mL乙腈依次淋洗，弃去淋洗液，用1mL乙腈洗脱黄曲霉素，收集洗脱液，并在50℃下浓缩至近干。最后，用1mL流动相复溶于色谱分析。

(2)实验中，使用C18色谱柱，柱温设置为30℃，流速为1.0mL/min。流动相为乙腈-水（80:20，v/v），紫外检测器波长为230nm。标准曲线制作时，配制浓度为0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL的黄曲霉素标准溶液，分别进样10μL，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。实验结果显示，黄曲霉素在0.05～2.0μg/mL范围内线性关系良好，相关系数R2=0.999。

(3)在实际样品分析中，取10份花生样品，按照上述方法进行前处理和色谱分析。结果显示，5份样品中黄曲霉素含量超过限量标准（≤20μg/kg），平均含量为30.5μg/kg，其中最高含量为50.2μg/kg。通过对超标样品进行追踪调查，发现这批花生在储存过程中温度控制不当，导致黄曲霉素污染。针对这一问题，建议加强花生储存过程中的温湿度控制，并定期进行黄曲霉素检测，以确保食品安全。

四、结果与讨论

(1)本实验采用高效液相色谱法对花生中黄曲霉素的含量进行了测定，结果显示，该方法具有较高的灵敏度和准确性。在实验中，我们使用了浓度为0.05～2.0μg/mL的黄曲霉素标准溶液，绘制了标准曲线，相关系数R2=0.999，表明该方法在所选浓度范围内具有良好的线性关系。通过对10份花生样品的分析，我们发