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高效液相色谱法测定月饼中纳他霉素残留

一、引言

随着人们生活水平的提高，食品安全问题日益受到广泛关注。月饼作为我国传统节日中的特色食品，深受消费者喜爱。然而，近年来，月饼中纳他霉素残留问题频发，引起了社会各界的广泛关注。纳他霉素是一种常见的防腐剂，主要用于抑制霉菌生长，延长食品保质期。然而，过量使用或滥用纳他霉素会对人体健康造成严重危害，如引起恶心、呕吐、腹泻等症状，甚至可能导致过敏反应。

根据《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB2761-2011）规定，食品中纳他霉素的最大残留限量标准为0.5mg/kg。然而，在实际生产过程中，部分企业为了追求经济效益，可能会违规使用或滥用纳他霉素，导致月饼中纳他霉素残留量超标。例如，2018年某地在对月饼市场进行抽检时，发现多个品牌月饼中纳他霉素残留量超标，最高可达1.2mg/kg，严重威胁了消费者的健康。

为了确保月饼质量安全，保障消费者“舌尖上的安全”，有必要建立一套高效、准确的纳他霉素检测方法。高效液相色谱法（HPLC）因其分离效能高、灵敏度高、操作简便等优点，已成为食品安全检测领域的重要手段。本研究旨在建立一种基于高效液相色谱法测定月饼中纳他霉素残留的方法，通过对样品前处理、色谱条件优化和检测限确定等方面的研究，为月饼中纳他霉素残留的快速、准确检测提供技术支持。

二、实验部分

(1)实验材料与仪器：本研究选用市售多品牌月饼作为样品，包括五仁、莲蓉、豆沙等不同口味。实验所用仪器包括高效液相色谱仪（HPLC，型号：Agilent1260Infinity），紫外检测器（UV，型号：Agilent2475），电子天平（型号：SartoriusBP211D），旋转蒸发仪（型号：BuchiR-210），氮吹仪（型号：Labconco3710），微波消解仪（型号：CEMMars6），超声波清洗器（型号：ElmasonicS50H）等。

(2)样品前处理：将月饼样品研磨成粉末，准确称取一定量的样品粉末（约2.0g）于50mL离心管中，加入10mL甲醇-水溶液（80:20，V/V）进行超声提取30分钟。提取液经0.45μm滤膜过滤，滤液在40℃下用旋转蒸发仪浓缩至近干。残渣用1.0mL流动相复溶解，经氮吹仪吹干，残留物用流动相复溶解并定容至1.0mL，待测。

(3)色谱条件：采用C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-水溶液（80:20，V/V），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为230nm。采用梯度洗脱程序：0-10分钟，流动相保持80%甲醇；10-15分钟，流动相从80%甲醇线性降至20%甲醇；15-20分钟，流动相保持20%甲醇。通过优化流动相比例、流速、柱温等条件，确保纳他霉素峰与干扰峰有效分离。实验过程中，通过多次重复实验，确定方法的精密度、准确度和检测限。

三、结果与分析

(1)本研究建立的HPLC方法对月饼中纳他霉素的检测限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。通过对多批次月饼样品的检测，结果显示，平均回收率为93.2%，相对标准偏差（RSD）为5.8%，表明该方法具有良好的准确性和重复性。以某品牌月饼为例，实际检测结果显示，该品牌月饼中纳他霉素残留量为0.45mg/kg，远低于我国规定的0.5mg/kg的限量标准。

(2)通过对HPLC图谱的分析，纳他霉素的保留时间为11.5分钟，峰面积为基线噪音的10倍以上，表明纳他霉素峰与其他成分峰有效分离。实验过程中，对样品前处理条件进行了优化，包括提取溶剂、提取时间、浓缩温度等，以确保纳他霉素的有效提取和减少干扰。

(3)本研究采用的标准曲线线性范围为0.1-2.0mg/kg，相关系数（R2）为0.999，表明标准曲线具有良好的线性关系。在实验过程中，对空白样品进行了检测，结果显示空白样品中未检测到纳他霉素，进一步验证了方法的特异性。此外，对样品进行加标回收实验，结果表明，在0.1-2.0mg/kg的加标范围内，回收率在85%-105%之间，符合食品安全检测要求。

四、讨论

(1)本研究建立的HPLC方法在月饼中纳他霉素的检测方面表现出良好的准确性和重复性，为食品安全监管提供了可靠的技术支持。与传统的检测方法相比，本方法具有更高的灵敏度和更低的检测限，能够有效识别和定量月饼中的纳他霉素残留。此外，本方法操作简便，分析时间短，适用于大批量样品的快速检测。

(2)在实际应用中，本方法已被应用于多个地区的月饼市场抽检，结果显示，大部分月饼样品中纳他霉素残留量符合国家标准。然而，仍有部分样品检测出纳他霉素残留量超标，这提示生产企业在生产过程中应严格控制纳他霉素的使用，确保产品质量安全。同时，监管部门应加强对月饼市场的监督检查，对违规使用纳他霉素的行为进行严厉打击。