粮油检测粮食中赭曲霉毒素A的测定超高效液相色谱方法编制说明.docxVIP

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粮油检测粮食中赭曲霉毒素A的测定超高效液相色谱方法编制说明

一、目的和适用范围

(1)本方法旨在为粮油产品中赭曲霉毒素A的检测提供一种高效、灵敏的分析技术。赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）是一种真菌毒素，主要来源于被赭曲霉属和毛霉菌属污染的粮食和饲料。OTA的摄入与多种人类疾病的发生密切相关，包括肾癌、膀胱癌、神经系统疾病等。因此，确保粮油产品中OTA含量符合国家标准，对于保障公众健康具有重要意义。本方法适用于稻谷、小麦、玉米、大豆等粮油产品中OTA的定量分析，检测限达到ng/g水平，适用于各类粮油产品的生产、加工和监管环节。

(2)本方法采用超高效液相色谱（UPLC）技术结合高灵敏度检测器，如二极管阵列检测器（DAD）或质谱（MS），对粮油产品中的OTA进行分离和定量。UPLC技术具有高分辨率、快速分离和低检测限等优点，适用于复杂样品的分析。本方法通过对样品进行前处理，如酸化提取、液液萃取和净化等，可以有效去除干扰物质，提高OTA的检测灵敏度。据统计，全球每年约有数百万吨粮食受到OTA污染，而本方法的应用有助于降低OTA污染粮食的流通，减少对人类健康的潜在风险。

(3)本方法已在我国多个粮油检测实验室得到应用，并成功应用于多个案例。例如，在某次对玉米样品的检测中，运用本方法检测出OTA含量为20ng/g，超过了我国食品安全国家标准限值10ng/g，从而及时采取措施，防止了不合格产品流入市场。此外，本方法还在对小麦、稻谷等粮油产品的检测中发挥了重要作用，为保障我国粮油产品的质量安全提供了有力技术支持。随着该方法在更多领域的应用，有望进一步提高粮油产品中OTA的检测效率和质量，为食品安全监管提供有力保障。

二、原理

(1)赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）的测定原理基于其特定的化学结构和性质。OTA是一种三环八氢氧杂萘邻酮衍生物，具有较强的紫外吸收特性。在超高效液相色谱（UPLC）分析中，OTA的检测通常采用高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）或液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术。在HPLC-UV模式下，OTA在特定波长下（如365nm）显示出强烈的紫外吸收峰，从而实现定量分析。LC-MS技术则通过质谱检测器对OTA进行分子量测定，结合保留时间和质谱图，实现对OTA的定性分析。

(2)在UPLC分析中，OTA的分离依赖于高效液相色谱柱的选择。常用的色谱柱材料包括C18、C8、C30等，其中C18柱因其良好的化学稳定性和选择性而被广泛应用。OTA与其他共存物质在色谱柱上的分配系数存在差异，从而实现分离。在流动相的选择上，通常采用水-乙腈的二元溶剂系统，并可能添加一定量的酸（如磷酸）或盐（如醋酸钠）以调节pH值，优化OTA的保留行为。在液液萃取过程中，OTA从样品基质中被提取到有机相中，随后通过旋转蒸发或氮吹脱溶剂，使OTA富集。

(3)在OTA的检测过程中，前处理步骤至关重要。常用的前处理方法包括酸化提取、液液萃取和净化等。酸化提取可以破坏样品中的蛋白质和脂质，释放OTA。液液萃取则是将OTA从水相转移到有机相，而净化步骤如固相萃取（SPE）或凝胶渗透色谱（GPC）则用于去除样品中的杂质，提高OTA的纯度和检测灵敏度。通过优化前处理条件，如提取溶剂、pH值、萃取时间和净化步骤，可以显著提高OTA的检测限和准确度。在UPLC-MS分析中，OTA的定量和定性主要通过比较标准品的保留时间和质谱图来实现，从而确保分析结果的可靠性和准确性。

三、仪器和试剂

(1)在进行粮油中赭曲霉毒素A（OTA）的测定时，所需仪器设备包括超高效液相色谱仪（UPLC）、液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）、超声波清洗器、旋转蒸发仪、氮气吹扫仪、高速离心机、固相萃取装置（SPE柱）、酸化器、移液器、振荡器等。UPLC仪器需具备较高的柱效和灵敏度，以满足OTA的快速分离和定量要求。LC-MS仪器则需配备高灵敏度的检测器，如电喷雾电离（ESI）或大气压化学电离（APCI），以确保OTA的准确鉴定和定量。以某实验室为例，其使用的UPLC系统具有柱效达100,000理论板数，LC-MS系统灵敏度可达1fg，完全满足OTA测定的需求。

(2)试剂方面，本方法中主要使用甲醇、乙腈、磷酸、醋酸钠、水等。甲醇和乙腈作为有机溶剂，用于样品的提取和净化。磷酸和醋酸钠用于调节溶液pH值，以优化OTA的保留行为。在水相中，通常使用超纯水，电导率应低于18.2MΩ·cm。在净化过程中，可能还会使用SPE小柱，如C18、C8、C30等，以去除样品中的杂质。以某次检测为例，使用100mg/g的C18SPE柱，对玉米样品进行净化，回收率在90%以上，表明SPE柱可有效去除干扰物质。

(3)标准品和对照品的选择也是仪器和试剂准备的关