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单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定酱油中伏马毒素B1、B2

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定酱油中伏马毒素B1、B2的重要步骤，其目的是去除干扰物质，提高检测灵敏度和准确性。首先，对酱油样品进行初步过滤，通常使用0.45μm的滤膜以去除悬浮颗粒和杂质。然后，根据样品中伏马毒素B1、B2的浓度，选择合适的稀释比例，以确保后续分析在检测限范围内进行。例如，当样品中伏马毒素B1、B2的浓度较高时，可能需要稀释100倍以上，而低浓度样品则可能只需稀释10倍。

(2)在稀释后的样品中，加入一定量的沉淀剂，如乙腈和盐酸，通过振荡混合使蛋白质和脂类等杂质沉淀。沉淀过程通常在室温下进行，时间约为30分钟。沉淀完成后，以离心机以3000rpm的速度离心10分钟，去除沉淀物。此时，上清液中含有伏马毒素B1、B2，可用于下一步的富集。

(3)富集伏马毒素B1、B2采用单克隆免疫亲和柱，该柱对伏马毒素具有高度的特异性。将处理后的上清液缓慢通过免疫亲和柱，伏马毒素B1、B2被柱上的单克隆抗体捕获。未结合的干扰物质则随洗脱液流出。富集后，使用含0.1%TFA的乙腈进行洗脱，收集洗脱液。为提高伏马毒素的回收率，洗脱过程通常在室温下进行，时间约为10分钟。最后，将收集的洗脱液在氮气下吹干，残留物用流动相复溶于适当体积的溶剂中，以便进行高