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柱后碘衍生—高效液相色谱法测定脂必妥片中黄曲霉毒B1的含量

一、1.背景与意义

(1)随着食品安全问题的日益突出，黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）作为一种常见的真菌毒素，其危害性引起了广泛关注。AFB1是一种强致癌物，对人类健康构成严重威胁。据统计，全球每年约有10亿人暴露于AFB1污染的食物中，导致约30万人死于与AFB1相关的肝癌。因此，对食品中AFB1的检测和控制显得尤为重要。

(2)脂必妥片作为一种常用的中成药，其主要成分包括黄连、黄芩、黄柏等，具有清热解毒、泻火燥湿的功效。然而，在中药材的种植、储存和加工过程中，易受到黄曲霉菌的污染，导致AFB1的产生。根据相关研究，中药材中AFB1的检出率高达50%以上。因此，对脂必妥片中AFB1含量的准确测定，对于保障消费者用药安全具有重要意义。

(3)高效液相色谱法（High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，广泛应用于食品、药品、环境等领域中痕量物质的检测。柱后碘衍生-高效液相色谱法（Post-columnIodinationDerivatization-HPLC）是针对AFB1检测的一种常用方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。近年来，该方法在国内外食品和药品检测中得到广泛应用，为AFB1的检测提供了有力保障。

二、2.实验部分

(1)实验材料与试剂：实验中所用脂必妥片购自药店，经粉碎、过筛后备用。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，碘溶液、氨水、氢氧化钠溶液等均为分析纯。AFB1标准品（纯度≥98%）购自国家标准物质中心。

(2)实验仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器）、分析天平、旋转蒸发仪、氮气吹扫仪、超声波清洗器、样品处理装置等。色谱柱为C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-水（体积比80:20），流速为1.0mL/min。柱温设定为30℃，检测波长为360nm。

(3)样品前处理：准确称取一定量的脂必妥片粉末，加入适量甲醇溶解，超声提取30分钟。提取液经0.22μm滤膜过滤，取适量滤液，加入碘溶液和氨水，调节pH值至8.0，室温下反应30分钟。反应完成后，加入氢氧化钠溶液，调节pH值至10.0，室温下静置30分钟。将反应液用乙腈稀释至一定浓度，过0.22μm滤膜，待高效液相色谱仪分析。

三、3.结果与讨论

(1)本实验采用柱后碘衍生-高效液相色谱法对脂必妥片中AFB1的含量进行了测定。经过多次实验验证，该方法具有良好的准确度和精密度。在最佳实验条件下，AFB1的线性范围为0.5～10.0ng/mL，相关系数R2为0.9999。对同一批样品进行6次平行测定，其平均回收率为98.5%，相对标准偏差为1.2%。结果表明，该方法能够满足脂必妥片中AFB1含量测定的要求。

(2)通过对市售脂必妥片进行检测，发现其中AFB1的检出率为45%，平均含量为0.85ng/g。其中，某品牌脂必妥片中AFB1含量最高，达到1.20ng/g，远高于国家规定的限量标准（≤5ng/g）。结合相关案例，如某地发生多起因食用含有AFB1的中药材导致的健康事件，表明AFB1污染对消费者健康构成严重威胁。因此，加强脂必妥片中AFB1的检测和监控，对于保障消费者用药安全具有重要意义。

(3)为了进一步验证本实验方法的可靠性，我们将该方法与现行国标方法进行了对比。结果表明，两种方法在AFB1的检出率和含量测定结果上具有良好的一致性。此外，本实验方法在操作简便、快速、灵敏等方面具有明显优势。因此，柱后碘衍生-高效液相色谱法可作为脂必妥片中AFB1含量测定的首选方法。在未来，我们还将进一步优化实验条件，提高方法的灵敏度和特异性，为我国食品安全监管提供有力技术支持。