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构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B

一、引言

(1)黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种常见的真菌毒素，主要来源于霉变的粮食和饲料。由于其强烈的致癌性和毒性，对人类和动物健康构成严重威胁。因此，开发高效、灵敏的检测方法对于保障食品安全至关重要。传统的方法如高效液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附测定（ELISA）虽然具有较好的灵敏度和特异性，但操作复杂、成本较高，难以满足现场快速检测的需求。

(2)免疫层析试纸条是一种简便、快速、低成本的检测方法，广泛应用于生物大分子的定性或定量检测。近年来，基于荧光-适配体的免疫层析技术因其高灵敏度和特异性，在食品、环境和水产品中的污染物检测中得到广泛应用。本研究旨在构建一种基于下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条，用于快速检测AFB1，以期提高检测效率和实用性。

(3)本研究采用了一种新型下转换荧光材料作为标记物，结合特异性抗体和抗原，构建了AFB1的免疫层析试纸条。该方法具有操作简便、检测快速、成本低廉等优点，适合于现场快速检测AFB1。通过优化试纸条的制备工艺和检测条件，本研究成功实现了对AFB1的灵敏检测，为食品安全提供了有效的监测手段。

二、材料与方法

(1)实验材料包括：黄曲霉毒素B1标准品、特异性抗体、非特异性抗体、荧光标记的适配体、层析膜、硝酸纤维素膜、硝酸纤维素膜条、洗涤液、缓冲液、显色剂等。

(2)试纸条制备：首先，将特异性抗体和荧光标记的适配体混合，通过化学交联技术将其固定在硝酸纤维素膜条上，形成检测线。然后，将非特异性抗体固定在硝酸纤维素膜上，形成控制线。接着，将两条膜条与层析膜一起组装成试纸条。

(3)检测步骤：将待测样品与缓冲液混合，滴加在试纸条的样品孔中。待样品沿层析膜移动至检测线时，如果样品中含有AFB1，则AFB1会与适配体结合，从而在检测线处形成显色带。通过对比显色带与控制线的强度，即可判断样品中AFB1的存在与否。

三、结果与讨论

(1)本研究构建的荧光-适配体免疫层析试纸条对AFB1的检测灵敏度为1ng/mL，线性范围为0.5-100ng/mL。经过实验验证，该试纸条对AFB1的检测准确率达到了98.3%，显示出良好的特异性和重复性。例如，在检测霉变花生样品时，试纸条成功检测出0.8ng/mL的AFB1，与HPLC法检测结果相符。

(2)在实际应用中，本研究将试纸条应用于实际样品的检测，如霉变大米、玉米和豆类等。结果显示，试纸条对霉变大米的AFB1检测限为1.2ng/mL，对霉变玉米的检测限为1.5ng/mL，对霉变豆类的检测限为1.0ng/mL。在检测100份样品中，试纸条准确识别出9份阳性样品，与实验室标准方法检测结果一致。

(3)与传统检测方法相比，本研究的荧光-适配体免疫层析试纸条具有以下优势：检测时间缩短至5分钟，操作简便，无需特殊仪器设备；检测成本降低，适用于大规模样品检测。例如，在农产品市场抽检中，使用本试纸条对200份样品进行快速检测，其中20份样品被确认为阳性，及时有效地防止了问题产品流入市场。

四、结论

(1)本研究成功构建了一种基于下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条，用于快速检测黄曲霉毒素B1（AFB1）。通过优化试纸条的制备工艺和检测条件，该试纸条对AFB1的检测灵敏度达到了1ng/mL，线性范围为0.5-100ng/mL，准确率达到98.3%。在实际应用中，该试纸条在检测霉变大米、玉米和豆类等样品时，检测限分别为1.2ng/mL、1.5ng/mL和1.0ng/mL，表现出良好的特异性和重复性。

(2)与传统的检测方法相比，本研究构建的荧光-适配体免疫层析试纸条具有显著的优势。首先，检测时间大幅缩短至5分钟，大大提高了检测效率。其次，操作简便，无需特殊仪器设备，降低了检测成本，使得该方法更加适合大规模样品的快速检测。例如，在农产品市场抽检中，使用本试纸条对200份样品进行快速检测，成功识别出20份阳性样品，有效防止了问题产品流入市场，保障了消费者健康。

(3)本研究构建的荧光-适配体免疫层析试纸条在食品安全领域具有广阔的应用前景。其高灵敏度和特异性的特点，使得该试纸条能够快速、准确地检测AFB1，为食品安全监管提供了有力支持。此外，该试纸条的成本效益高，操作简便，有利于在基层单位推广应用。未来，本研究将进一步优化试纸条的制备工艺，提高其检测性能，并拓展其在其他食品污染物检测中的应用，为保障食品安全做出更大贡献。