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第五部分POLD1基因表达受到抑制
后对MCF-7细胞的生长及周期的影响
Trizol提取MCF-7细胞总RNA
反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定
细胞转染及稳定表达细胞株的筛选
细胞生长曲线实验
血清依赖性实验
单细胞克隆形成实验
软琼脂集落形成实验实验方法
胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞
流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析
Westernblot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达
反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子,也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合,即抑制了该mRNA的翻译。
近年来通过人工合成反义RNA的基因,并将其导入细胞内转录成反义RNA,即能抑制某特定基因的表达,阻断该基因的功能,有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。
反义RNA
生长曲线的测定
血清依赖性实验结果
单细胞克隆形成率的比较
软琼脂集落形成比较
TdR双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化
Westernblot检测转染细胞中周期相关基因的表达
结果与讨论
KpnI
上游：5’ATGTTTGGGTACCACGGGCAC3’
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EcoRI
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下游：5’CCAGGAATTCGAATGTTTGTA3’引
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pXJ41-as-POLD1重组质粒图谱
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1:MCF-as-POLD1
2:MCF-7
3:MCF-pXJ41
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2:MCF-7
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