组织培养实验室及操作技术.ppt

四、洗涤技术玻璃器皿洗涤01新购置玻璃器皿021%稀HCl03浸渍12h04洗衣粉洗涤05清水冲洗06晾干备用07已用过的玻璃器皿082、塑料用品洗涤蒸馏水冲洗已用过的塑料器皿晾干备用2%NaOH浸泡12h清水冲洗清水冲洗新的塑料器皿打开即用2%—5%盐酸浸泡30min冲洗添加标题金属用品洗涤热洗衣粉水洗净添加标题擦干添加标题配方成分弱液次强液强液常用配方重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml）501001000100200100060800200100200800清洁液配方五、灭菌技术物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌1、灭菌方法2、灭菌培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法压力在9.8×104—10.8×104Pa温度在121℃灭菌20—30min玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌干热消毒灭菌饱和蒸汽压力与其对应的温度饱和蒸汽压力温度（℃）饱和蒸汽压力温度（℃）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0551.1251.2661.4061.5431.6811516182022243050121.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.6（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌2014（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用2015接种室灭菌培养材料的接种超净工作台接种室70%—75%的酒精擦洗紫外灯照射紫外灯照射空气消毒灭菌（6）外植体灭菌流水冲洗10—20min或更长时间0170%—75%酒精中浸泡30s021%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右03蒸馏水冲洗4—5次04在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右05备用06常用消毒剂消毒灭菌比较表消毒剂使用浓度（%）去除难易消毒时间（min）效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗生素硝酸银9~102饱和溶液1~210~120.1~170~754~5（mg/L1易易易易最易较难易中较难5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好较好好无菌操作实验器材的灭菌无菌接种消毒实验台卫生培养室培养实验员消毒实验室、无菌台灭菌消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。添加标题01打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。添加标题02用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。添加标题04开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。添加标题03用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。9、取下接种器械，在火焰上消毒。把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。接种结束后，清理和关闭超净工作台。注意：操作期间应经常用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上消毒。第二节植物组织培养所需的环境条件及营养成分一、所需环境条件与自然条件一样，组织培养中的材料的生长要受到温度、光照、湿度等各种物理条件，不同气体、培养基的组成、pH值和渗透压等各种化学条件，以及外植体部位、大小、细胞密度等各种生物条件等环境条件的影响。如何根据需要来控制培养条件是组织培养中的一个重要问题。温度光照湿度气体培养基的渗透压pH值植物材料一般最适温度在25±2℃之间环境条件最常用的光周期是光照16h，黑暗8h一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环境的相对湿度在70%—80%氧气是愈伤组织生长所必需的调节渗透压常常从糖入手植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0—6.5二、营养成分植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：组成各种化合物，参与机