消毒剂杀灭呼吸道病毒效果测试方法报法制司.pdfVIP

4.11恒温水浴箱。

4.12可调移液器及配套塑料吸头。

4.13普通离心机。

4.14标准硬水，按下列配方配制，硬度为324mg/L:

氯化钙(CaCl2)0.034g

氯化镁(MgCl·6HO)0.139g

22

蒸馏水加至1000mL

4.15有机干扰物：称取30g牛白蛋白，于1000mL容量瓶内，加蒸馏水至刻度，溶解后用微孔滤

膜(孔径为0.45μm)滤过除菌，冰箱保存备用。3%牛白蛋白，代表一般污染对象上的有机物。0.3%

牛白蛋白，代表先经清洁操作，然后进行的对象上污染的有机物或连续冲洗的物品上污染

的有机物。

4.16电动混合器。

4.17计时装置。

5悬液的与血凝滴度、鸡胚半数剂量（EID50）的测定

5.1悬液的

5.1.1参照WS285，采用鸡胚尿囊腔接种培养法。选9d～11d龄SPF鸡胚，用照蛋器灯下照检，选生

长良好、外壳光滑的鸡胚（试验前标出鸡胚眼位置），用75%的圈好的气室部位。

5.1.2用后的剪刀在鸡胚眼的对侧打一小孔。

5.1.3用配有5号针头的1.0mL无菌注射器吸取用无菌生理盐水稀释的流感悬液样本0.2mL，从

小孔进针（约针1/3～1/2长）接种。

5.1.4用灯溶化的石蜡密封小孔。

5.1.5将鸡胚气室朝上，于33℃～35℃加湿孵箱培养2d～3d收取尿囊液（24h内者弃之）。

5.1.6将鸡胚置4℃冰箱内10h～18h，凝固血管。

5.1.7用75%气室部位，扩大壳口，挑开壳膜，吸取尿囊液于试管中；3000r/min离心5min，

取上清液分装（即流感悬液），置-80℃冰箱内保存。

5.2血凝滴度测定

5.2.1取96孔V型血凝滴度测定板，分别加入无菌生理盐水50μL。

5.2.2在第1孔内加入50μL悬液，用加样器吹打后吸取50μL于第2孔内，以此类推对倍稀释，

最后1孔吸取50μL弃去。

5.2.3每孔加入50μL红细胞悬液，摇匀，静止放置。

5.2.4红细胞对照：取3孔直接加入50μL生理盐水，再加入50μL红细胞悬液。

5.2.5结果观察：置室温30min时与45min时各观察一次红细胞凝集情况，以45min时为最终观察结

果。

5.2.6血凝滴度结果判定：以“＋＋＋＋”、“＋＋＋”、“＋＋”、“＋”、“±”、“－”六个

标准判定（表1）。血凝滴度以“＋”以上为阳性，即有生长。“±”以下为，即无生长。

表1血凝滴度分级判定标准

分级标准判定

＋＋＋＋为一层红细胞均匀铺于孔底

＋＋＋基本同上，但边缘不整齐

＋＋红细胞在