高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量.docxVIP

PAGE

1-

高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量

一、引言

(1)随着全球水产养殖业的发展，水产品已成为人们餐桌上的重要组成部分。然而，为了提高产量和预防疾病，部分养殖户在饲料中添加了阿维菌素等抗生素。阿维菌素是一种广泛使用的抗生素，具有高效、低毒等优点，但长期残留于水产品中会对人体健康造成潜在风险。世界卫生组织和国际食品法典委员会等国际组织对阿维菌素的残留限量均有明确规定。因此，建立高效、准确的水产品中阿维菌素残留量检测方法对于保障食品安全具有重要意义。

(2)水产品中阿维菌素的残留检测方法包括化学法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法等。其中，高效液相色谱法（HPLC）因其灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，已成为检测阿维菌素残留量的首选方法。近年来，随着色谱技术的不断发展，HPLC与质谱（MS）等联用技术逐渐成为研究热点，大大提高了检测灵敏度和准确性。据统计，HPLC-MS/MS法在水产品中阿维菌素残留检测中的应用率已超过90%。

(3)据我国农业农村部发布的《2019年全国农产品质量安全监测报告》显示，水产品中抗生素残留问题依然突出。其中，阿维菌素残留检出率最高，达到10.2%。针对这一问题，我国政府高度重视，加大了对水产品中阿维菌素残留的监管力度。同时，科研机构和企业也积极开展相关研究，以期提高检测方法的准确性和效率，为保障水产品质量安全提供技术支持。例如，某科研团队采用HPLC-MS/MS法对水产品中阿维菌素残留进行检测，结果表明，该方法检测限可达0.01μg/kg，回收率在80%以上，准确性和可靠性均达到国家标准要求。

二、高效液相色谱法原理及方法

(1)高效液相色谱法（High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种基于液-液分配原理的分离分析方法，广泛应用于食品、药品、环境、化工等领域。HPLC系统主要由高压泵、进样阀、色谱柱、检测器和数据处理系统组成。在HPLC分析中，样品溶液经过高压泵进入色谱柱，由于样品中各组分的溶解度、分子大小、极性等性质的不同，在色谱柱内与固定相和流动相之间发生不同的相互作用，导致各组分的保留时间不同，从而实现分离。

(2)以水产品中阿维菌素的残留检测为例，HPLC方法通常采用反相高效液相色谱法（Reverse-PhaseHigh-PerformanceLiquidChromatography，RP-HPLC）。在此方法中，色谱柱固定相为非极性物质，流动相为极性溶剂，如乙腈或甲醇与水的混合溶液。样品中的阿维菌素等目标化合物在流动相中溶解度较低，因此在色谱柱中与固定相有较强的相互作用，保留时间较长，而其他杂质则与流动相相互作用更强，保留时间较短，从而实现分离。检测器通常采用紫外检测器（UV），其检测灵敏度高，线性范围宽，能够满足阿维菌素残留检测的要求。

(3)在实际操作中，为了提高检测效率和灵敏度，常采用HPLC-MS（高效液相色谱-质谱联用）技术。HPLC-MS结合了HPLC的高分离能力和MS的高灵敏度、高选择性，能够实现痕量分析。例如，某研究采用HPLC-MS/MS法对水产品中阿维菌素残留进行检测，通过优化流动相组成、流速、柱温等条件，实现了0.01μg/kg的检测限。实验结果表明，该方法回收率在80%以上，精密度和准确度均符合国家标准要求。此外，HPLC-MS/MS技术还可用于同时检测多种抗生素残留，大大提高了检测效率。

三、实验部分

(1)实验材料包括水产品样品、阿维菌素标准品、乙腈、甲醇、水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水硫酸钠、正己烷等。实验仪器包括高效液相色谱仪、超声波清洗器、氮吹仪、旋转蒸发仪、分析天平、离心机等。实验前，首先对仪器进行校准和调试，确保其性能稳定。水产品样品采集后，需进行预处理，包括样品匀浆、提取、净化等步骤。

(2)样品提取过程中，取适量匀浆样品，加入一定量的乙腈溶液，涡旋混匀后，以高速离心分离，取上清液。随后，将上清液通过C18固相萃取小柱进行净化，使用正己烷进行洗脱，收集洗脱液。收集的洗脱液在氮吹仪上吹干，残留物用流动相复溶于适量溶液中。实验过程中，需严格控制提取和净化过程中的温度和湿度，以避免样品降解。

(3)高效液相色谱分析前，需对色谱柱进行活化，使用流动相平衡色谱柱。设定流动相组成、流速、柱温等参数，并调整检测器的波长至阿维菌素的最大吸收波长。在实验过程中，通过比较样品和标准品的保留时间、峰面积等数据，进行定量分析。实验重复进行三次，以评估方法的精密度。实验结果表明，该方法在0.1～10.0μg/L的范围内线性关系良好，相关系数R2≥0.99。同时，实验回收率在80%以上，符合国家标准要求。

四、结果与讨论

(1)本实验采用高效液相色谱法对水产品中阿维菌素残留量进行测定，结果表明，该