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β-七叶皂苷对结肠癌细胞的抑制作用及分子机制的初探--第1页

β-七叶皂苷对结肠癌细胞的抑制作用及分子机制的初探

癌症是当今最难攻克的疾病之一。作为恶性肿瘤,结肠癌是一种进展迅速、

预后很差的致命性疾病,如何防治结肠癌是医学领域的重要课题之一。

中药是中华民族的瑰宝,β-七叶皂苷是从七叶树科天师栗(Aesculus

WilsoniiRebd)或中药娑罗子(ChineseSemenAesculi)中提取的天然三萜糖苷

类化合物。它主要用于脑水肿、抗水肿、增强静脉张力、改善微循环以及慢性静

脉功能不全等疾病的治疗,具有血管调节、抑制胃排空、对保护小鼠实验性肝损

伤、保护神经和抗肿瘤作用。

β-七叶皂苷对常见的大肠癌HT-29细胞的抗癌作用有所报道,但对结肠腺

癌LoVo细胞的抑制作用及其分子机制,却少见报道。我们利用MTT法、免疫荧

光分析、流式细胞术(FCW)、蛋白质印迹法(WB)、激光扫描共聚焦显微镜成像(LSCM)

等技术研究β-七叶皂苷抗结肠癌作用及其Wnt/β-catenin信号转导通路的影

响。

研究β-七叶皂苷对结肠癌细胞的作用,主要从三个方面来阐述:β-七叶皂

苷对LoVo细胞生物生长抑制作用、β-七叶皂苷对结肠癌LoVo细胞的周期和

凋亡的影响、核心分子β-catenin的表达水平和细胞内分布。一是β-七叶皂苷

对LoVo细胞生物生长抑制作用。

定量方面,利用MTT法,用0、10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml和100μg/ml

的β-七叶皂苷处理细胞24h、48h和72h,MTT法检测显示,细胞具有明显的浓度

(剂量)和时间相关性,作用浓度越大、作用时间越长,其抑制作用越明显。同时,

测得IC50为44.1μg/ml。

定性方面,利用间接免疫荧光法,用0、10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml和

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100μg/ml的β-七叶皂苷处理细胞72h,荧光显微镜显示,细胞内的荧光强度随

着时间的推移逐渐降低。表明随着药物作用浓度的增高,β-七叶皂苷对LoVo

细胞生长抑制作用也不断增强,其增殖活性明显被抑制,并且也呈作用-剂量相关

性。

二是β-七叶皂苷对结肠癌LoVo细胞的周期和凋亡的影响。宏观方面,从细

胞生物学水平,以一定浓度(50μg/ml)的β-七叶皂苷处理细胞0、24h、48h和

72h后,经PI染色于光学显微镜下观察细胞形态学改变,明显逐渐出现核固缩、

膜皱缩成泡状、质壁分离等细胞凋亡现象。

微观方面,从分子生物学水平,利用DNA含量分析LoVo细胞的周期和细胞凋

亡,以不同浓度(0、10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml和100μg/ml)的β-七叶皂

苷处理细胞72h,经PI染色后以流式细胞仪检测细胞DNA含量。结果表明,LoVo

细胞的周期变短,S期被阻滞,导致进入G2/M期的细胞减少。

出现细胞凋亡小峰,细胞凋亡期明显逐渐延长,细胞被β-七叶皂苷诱导凋亡。

三是研究β-七叶皂苷对Wnt/β-catenin信号通路核心分子β-catenin表达水

平和细胞内分布的影响。

蛋白印迹(WB)分析表明药物浓度较低时(10μg/ml和30μg/ml),β

-catenin蛋白表达/抑制作用不明显;药物浓度较高时(50μg/ml和100μg/ml),

β-catenin蛋白表达/抑制比分别为0.53和0.27,存在显著差异,具有统计学意

义(Plt