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细胞活体染色技术.pptx

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实验三、细胞活体染色技术演讲人:赵鹏飞

观察动、植物活细胞内线粒体,液泡系的形态、数量与分布。2学习细胞活体染色的方法。1一、实验目的

0102活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂,在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造,更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。詹纳斯绿B是一种活体染色剂,专一用于线粒体的染色并且呈现染成蓝色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合,从而出现蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。必须指出的是,只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化,从而使它显出颜色,因此,在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常,需要把生物材料置于0℃~4℃的冰水浴低温中,并且操作要迅速。二、实验原理

中性红是液泡系的特殊活体染色剂,它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色,在细胞处于生活状态下细胞质和核不被染色,该染料对液泡系具有一定专一性。盼蓝(trypanblue)是一种偶氮类酸性染料,可溶于水,它可以通过死亡细胞的质膜而使细胞着色,但不能通过活细胞的质膜,故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。它还常用于检测细胞膜的完整性。0102

三、实验用品(一)材料:黄豆根尖、洋葱、小鼠。(二)器械:显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、水纸等。(三)试剂:l、Ringer氏液2、1/3000中性红溶液3、1/5000詹纳斯绿B4、台盼蓝染色液5、香柏油、二甲苯、蒸馏水等

四、实验方法(一)液泡系的中性红活体染色l、用双面刀片将黄豆芽根尖(约l一2cm2)处小心纵切断面,一定要薄且均匀。2、在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5一10分钟。3、吸去染料,滴加Ringer氏液一滴,盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色,其形态、大小如何、分布位置。

线料体的活体染色l、用植物细胞观察线粒体的活体染色1用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2),放在载玻片上用1/5000詹纳斯绿B染色约30分钟。2吸出染液,滴加Ringer氏液,盖片、镜检,注意观察线粒体分布及所呈形状。用动物细胞观察线粒体的活体染色。3取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块,放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。4将肝组织洗净后吸去血液,加入1/5000詹纳斯绿B染液染色30分钟,注意不可将组织块完全淹没。5

染色后撕开组织块,这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。用吸管吸取溶液,放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发,加盖玻片,即可镜检。用油镜观察活染色的线粒体标本,要不断地来回转动细调焦螺旋,使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气,线粒体的染色才显得非常清楚。人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察

取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上,滴2滴1/5000詹纳斯绿B溶液。用牙签取口腔上皮细胞,将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中,染色10一15分钟(注意不能干燥),盖上盖片,吸去多余的溶液,即可镜检。台盼蓝染色鏊别死活细胞。抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上,滴加l%台盼蓝1滴,盖上盖玻片于显微镜下观察。

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