原创力文档- 1、本文档共18页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
黑龙江生物科技职业学院生物制药技术生物别离技术主讲人：张爱华第一页，共十八页。
实训七、银耳多糖的制备及鉴定实验原理2材料用具3操作方法4目的要求2155本卷须知第二页，共十八页。
目的要求了解银耳多糖制备的根本原理掌握糖类物质提取纯化的根本操作技术第三页，共十八页。
原理银耳多糖主要成分为酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五类，不含核酸、蛋白质类物质。可利用银耳子实体经水浸泡捣碎，酶浸提，乙醇沉析别离可制得银耳多糖粗品，再用CTAB(溴化十六烷基三甲铵)络合法进一步精制得银耳多糖纯品并进行多糖的鉴定。第四页，共十八页。
材料用具银耳子实体干品〔50g左右〕烧杯、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、量筒、离心机、恒温水浴锅、透析袋、滤纸、组织捣碎机、不锈钢锅。第五页，共十八页。
试剂〔1〕1％复合酶制剂(含果胶酶、纤维素酶和中性蛋白酶食品级复合酶)；〔2〕2％溴化十六烷基三甲铵〔CTAB〕配制：取2gCTAB溶于100mL蒸馏水中，摇匀备用；〔3〕α-萘酚配制：α-萘酚5g溶于95％乙〔4〕5%三氯乙酸-正丁醇溶液；〔5〕2mol／L的氢氧化钠溶液；〔6〕0.5％甲苯胺乙醇溶液；〔7〕2mol／L氯化钠溶液；〔8〕2mol／L盐酸溶液；〔9〕活性炭；硅藻土。〔10〕1％融菌酶制剂；〔11〕无水乙醇；〔12〕浓硫酸；〔13〕乙醚。第六页，共十八页。
操作方法1.银耳预处理20g锈钢锅中加水1600mL20℃～25℃浸泡30min捣碎机中捣碎银耳浆液第七页，共十八页。
操作方法2mol／L盐酸溶液调pH至6.3加入1％复合酶制剂50℃下酶促反响40min银耳浆液2.酶浸提80℃灭酶，保温浸提约1.5h80℃水浴浓缩第八页，共十八页。
操作方法等体积5％三氯乙酸-正丁醇溶液摇匀离心〔3000r/min〕15min浓缩液3.多糖的沉淀〔有机酸除杂〕下层清液备用吸去上层正丁醇中层变性蛋白第九页，共十八页。
操作方法2mol／L的氢氧化钠溶液调pH至7摇匀抽滤3.多糖的沉淀〔脱色、透析〕下层清液备用加1％活性炭80℃加热15min脱色滤液扎袋流水透析12h80℃水浴浓缩抽滤第十页，共十八页。
操作方法加3倍量95％乙醇摇匀3.多糖的沉淀〔乙醇沉析〕抽滤液离心〔3000r/min〕15min沉淀用无水乙醇洗2次乙醚洗涤1次50℃以下真空枯燥第十一页，共十八页。
操作方法4.精制〔一〕取粗品1g溶于100mL水中搅拌静置2h2％CTAB滤液离心除不溶物60℃解离4h离心3000r/min15min80℃热水洗氯化钠2mol／L溶液100mL第十二页，共十八页。
操作方法4.精制〔二〕解离液加三倍量95％乙醇透析液80℃浓缩离心3000r/min15min精品银耳多糖离心3000r/min15min沉淀用无水乙醇、乙醚洗涤上清液流水透析10h50℃真空枯燥第十三页，共十八页。
操作方法5.多糖的鉴定〔一〕观察硫酸层与糖溶液界面处颜色变化透析液1mLα-萘酚溶液2滴颜色变化摇匀沿管壁缓加入浓硫酸1.5mL(勿振动)第十四页，共十八页。
操作方法5.多糖的鉴定〔二〕透析浓缩透析浓缩2mL点于滤纸0.5％甲苯胺乙醇溶液染色参加2％CTAB溶液2～4滴观察现象第十五页，共十八页。
本卷须知1.酶促反响的时间、温度应控制好。2.在制备全流程中应时刻注意温度，不能超过80℃第十六页，共十八页。
思考题1．参加复合酶制剂有何作用？2．CTAB络合法与乙醇沉析法别离银耳多糖有何异同？3．为何在制备全流程中应时刻注意温度不能超过80℃？第十七页，共十八页。
内容总结黑龙江生物科技职业学院。银耳多糖主要成分为酸性杂多糖、中性杂多糖、。胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五类，。可利用银耳子实体经水浸泡捣碎，酶浸提，。进一步精制得银耳多糖纯品并进行多糖的鉴定。量筒、离心机、恒温水浴锅、透析袋、。滤纸、组织捣碎机、不锈钢锅。〔1〕1％复合酶制剂(含果胶酶、纤维素酶和中性蛋白酶食品级复合酶)。取2gCTAB溶于100mL蒸馏水中，摇匀备用。20℃～25℃。参加2％CTAB溶液2～4滴第十八页，共十八页。
文档评论（0）