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蔬菜、水果农药残留快速检测操作指南

一、检测原理与设备介绍

(1)农药残留快速检测技术主要基于酶联免疫吸附测定（ELISA）原理，该技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便、快速准确等优点。通过特异性的抗体与农药残留物结合，再加入酶标记的二抗，通过酶催化底物产生颜色反应，根据颜色深浅判断农药残留量。该检测方法适用于多种农药残留的快速筛查。

(2)检测设备主要包括酶标仪、离心机、振荡器、移液器等。酶标仪用于检测样品中的颜色变化，离心机用于样品的分离，振荡器用于样品的混合，移液器用于精确移取试剂。这些设备的使用确保了检测过程中样品处理和反应条件的稳定，提高了检测结果的准确性和可靠性。

(3)检测前需要对设备进行校准和维护，确保检测结果的准确性。校准过程包括使用标准品对酶标仪进行校准，检查移液器的准确度，以及对离心机进行平衡测试。维护则包括定期清洁设备，更换易损件，以保证设备的正常运行。正确的设备操作和维护对于确保检测结果的准确性至关重要。

二、样品准备与处理

(1)样品准备与处理是农药残留快速检测中的关键步骤。首先，需根据检测要求对蔬菜和水果样品进行清洁，去除表面泥土和杂质。对于蔬菜，通常使用流水清洗法，以去除附着在表面的农药残留。以苹果为例，清洗过程中，每分钟冲洗流量应控制在0.2-0.3L，清洗时间不少于3分钟。

(2)清洗后，将样品进行切割和匀浆处理。以苹果检测为例，需将苹果去皮去核，切成小块，然后使用组织匀浆机以转速8000-10000rpm匀浆2分钟。匀浆过程中，加入适量的缓冲溶液，以保持样品中的农药残留不降解，同时确保样品充分混合。例如，在检测有机磷农药残留时，通常加入pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液。

(3)匀浆完成后，需对样品进行离心处理。以苹果样品为例，将匀浆后的样品在4000rpm的转速下离心10分钟，分离出上清液作为待测液。离心过程中，需注意温度和转速的控制，以保证样品的稳定性。离心后的上清液可直接用于酶联免疫吸附测定，或者通过进一步处理，如稀释、过滤等，以降低样品的浓度，适应检测仪器的检测范围。例如，在实际检测中，对于超过检测限的样品，通常需进行适当稀释，以获得准确的检测结果。

三、检测步骤与操作

(1)检测步骤首先开始于试剂的准备和稀释。根据试剂盒说明书，将酶联试剂按照要求进行稀释，确保反应体系中的抗体和酶标二抗浓度符合检测要求。例如，将酶联试剂按照1:100的比例稀释，并使用磷酸盐缓冲溶液（PBS）作为稀释液。同时，准备好底物溶液和终止液，确保所有试剂在室温下平衡30分钟，以保证反应条件的一致性。

在进行样品检测前，首先在酶标板上的各孔中加入适量的样品处理液，然后加入适量的待测样品上清液，每孔50μl。以蔬菜农药残留检测为例，将稀释后的样品上清液加入酶标板中，每个样品重复三个孔，以减少实验误差。加入样品后，将酶标板轻轻振荡，确保样品与试剂充分混合。

(2)接下来，将酶标板放入酶标仪中，设置适当的检测波长和参考波长，进行孵育。通常情况下，将酶标板在37℃下孵育30分钟，以使酶标二抗与样品中的农药残留物充分结合。孵育结束后，弃去孔中的液体，使用洗涤液对酶标板进行3次洗涤，每次洗涤后用吸水纸轻拍孔底部，确保洗涤彻底。

洗涤完成后，向各孔中加入适量的酶联试剂，每孔50μl，再次放入酶标仪中孵育30分钟。孵育结束后，弃去孔中的液体，使用洗涤液进行同样的洗涤步骤。最后，向各孔中加入底物溶液，每孔100μl，在酶标仪上读取各孔在450nm处的吸光度值。记录数据后，向各孔中加入终止液，终止酶促反应。

(3)在获取吸光度值后，需进行数据分析和结果判定。首先，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。通常情况下，标准曲线呈线性关系，线性范围为0.1-2.0ng/ml。根据样品的吸光度值，从标准曲线上查找到对应的农药残留浓度。若样品浓度低于检测限（如0.05ng/ml），则判定为未检出。

此外，为提高检测结果的准确性，需进行质量控制。在检测过程中，设立阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照用于确认检测系统的灵敏度，阴性对照用于排除假阳性结果，空白对照用于排除实验过程中的污染。若阳性对照结果为阳性，阴性对照结果为阴性，则判定检测结果有效。同时，对检测结果进行统计学分析，以确定其可靠性。

四、结果判定与记录

(1)结果判定首先基于样品的吸光度值。根据预定的检测限和标准曲线，样品的吸光度值如果超过检测限（例如，对于某些农药残留的检测限为0.5mg/kg），则判定为阳性结果，即样品中检测到农药残留。以某次检测为例，一份蔬菜样品的吸光度值为0.75，超过0.5的检测限，因此判定该样品含有农药残留。

(2)在记录结果时，除了记录吸光度值外，还需记录样品的来源、处理方法、试剂批号、仪器型号等信息。例如，某次水