医用分子遗传学DNA复制.pptVIP

DNA聚合酶?的作用DNA聚合酶?:多亚基、多功能酶。大亚基：DNA聚合酶活性。?100nt/次小亚基：引物酶活性，合成RNA。起始DNA的合成：合成RNA引物和在RNA3’羟基端合成一段DNA。DNA聚合酶?的作用DNA聚合酶?的结构多亚基组成：P125大亚基，催化亚基，含聚合酶和外切酶活性P50与增殖细胞核抗原(PCNA)结合相关P66P12DNA聚合酶?的功能主要DNA复制酶：DNA聚合酶活性，延伸DNA链。?与RFC和PCNA形成“全酶”，在RFC和PCNA等的协同下，促使DNA聚合酶?的解离，DNA聚合酶?接替DNA聚合酶?继续DNA链的合成-------DNA聚合酶?向DNA聚合酶?的转换。复制校正功能：3’-5’外切核酸酶活性01DNA聚合酶?、?主要功能：DNA修复。02DNA聚合酶γ：线粒体DNA复制二、真核生物DNA聚合酶附属蛋白PCNA：增殖细胞核抗原（ProliferatingCellNuclearAntigen)，DNA聚合酶的附属蛋白，参与DNA的合成，类似?二聚体。RFC：复制因子C(ReplicationFactorC)。多亚基复合物，DNA聚合酶的附属蛋白，识别引物末端,参与链的延长。类似?复合物。PRP1和PRP2PrimerRecognitionProtein增加DNA聚合酶?与模板－引物末端的亲和力，增加DNA聚合酶?的活性。PCR与TaqDNA聚合酶TaqDNA聚合酶特性（TaqDNApolymerase）最初由从热泉中的细菌中出来??性质具有5’－3’聚合酶活性以及依赖于聚合作用的外切酶活性??耐热性此酶是一种耐热的依赖于DNA的DNA聚合酶最适反应温度为72℃－80℃??应用能以高温变性的靶DNA分离出来的单链DNA为模板，进行DNA的体外扩增－PCR反应。三引物酶primase

DNA聚合酶不能引发DNA新生链的合成，只能在已存在的DNA链或RNA链上延长DNA。引物酶催化引物RNA的合成。

四连接酶ligase

1967年发现催化冈奇片段间磷酸二酯键的形成，二个片段必须都与完整的模板链结合。大肠杆菌的连接酶需NAD+，真核细胞的连接酶需要ATP。可连接双链DNA中的单链切口，RNA-DNA杂交体双链单链切口，不能连接双链RNA中的单链切口。五与DNA解链和解旋有关的酶五与DNA解链和解旋有关的酶01DNA螺旋酶（Helicase）添加标题02催化双螺旋解旋和解链添加标题03需消耗ATP添加标题拓扑异构酶（Topoisomerase)DNA回旋酶（Gyrase）促进DNA双链的解开,需消耗ATP。兼有内切酶和连接酶活性,可迅速使DNA两条链断开又接上,消除解链酶产生的拓扑张力。当引入负超螺旋时需要由ATP提供能量,同复制有关。（三）单链结合蛋白DNA单链结合蛋白（SingleStrandBindingprotein，SSB）复制因子A主要功能：与单链亲和力大，稳定单链结构，保护单链免受核酸酶水解和阻止双链形成，有利复制进行。第二节DNA复制的基本过程复制子RepliconReplicon基因组中能独立进行复制的结构单位称复制子,或者说单个复制起始点控制的DNA,包含从起始位点到终止位点的全部DNA。复制的起始位点控制并起始复制的特定位点。终止位点终止复制的位点每个细胞周期启动复制一次。添加标题复制在特定部位起始。添加标题原核生物仅有一个起始部位。添加标题真核生物有多个起始部位。复制起始点、复制子与复制叉添加标题半保留复制，必须解决解开双螺旋的问题。

250Mb的1号染色体，需要旋转250万次。添加标题DNA拓扑异构酶解决了解开DNA双螺旋的问题第一节DNA复制的一般特征1962,NobelPrizeDNA的生物学功能储存遗传信息复制遗传信息表达遗传信息遗传变异Watson(Nature,1953):我们假设的特异的（碱基）配对方式提示了遗传物质可能的复制机制：每一条链均可作为合成一条新链的模板，就使子代双螺旋与母本完全一致。二、DNA复制方式DNA如何进行复制？半保留分散式全保留15NP0P1P2P3P4P0＋P2P0＋P414N15N/14N15NMeselson-Stahlexperiment1958,PNAS第二代出现两条带，一条完全轻带一条中带否定了分散式复制