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高效液相色谱法测定运动营养食品中黄曲霉毒素M_(1)方法研究

一、1.引言

黄曲霉毒素M1（AFM1）是一种常见的真菌毒素，主要来源于被黄曲霉属真菌污染的粮食和其他农产品。由于AFM1具有较强的致癌性和致突变性，因此，对食品中AFM1的检测与分析具有重要意义。在运动营养食品中，AFM1的污染问题同样不容忽视，因为这些产品往往含有蛋白质、氨基酸、维生素等多种营养成分，且在生产和储存过程中容易受到微生物污染。为了保障消费者的健康，研究一种高效、灵敏、简便的AFM1检测方法至关重要。

高效液相色谱法（HPLC）作为一种常用的分析技术，具有分离效能高、检测灵敏度高、样品处理简单等优点，在食品安全检测领域得到了广泛应用。本研究旨在建立一种基于高效液相色谱法测定运动营养食品中AFM1的方法。该方法结合了固相萃取（SPE）技术，能够有效地去除样品中的杂质，提高检测的准确性和灵敏度。通过对该方法进行优化和验证，为运动营养食品中AFM1的检测提供了一种可靠的分析手段。

近年来，随着科学技术的不断发展，食品检测技术也在不断创新和进步。在AFM1的检测方法中，液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术因其高灵敏度、高专一性和高分辨率等优势，已成为食品安全检测领域的主流技术。然而，LC-MS技术对仪器设备和操作人员的技能要求较高，且检测成本相对较高。因此，本研究在保证检测灵敏度和准确性的前提下，力求简化操作步骤，降低检测成本，以提高该方法在实际应用中的可行性。

本研究首先对样品前处理条件进行了优化，包括提取溶剂的选择、提取温度和时间的控制、净化柱的选择等。通过对比不同前处理方法的提取效率和净化效果，最终确定了最佳的前处理条件。随后，对高效液相色谱法的分离条件进行了优化，包括流动相的选择、流速的设定、柱温的调控等。通过优化这些条件，提高了AFM1的分离度和峰形，为后续的检测提供了良好的基础。

二、2.实验材料与方法

(1)实验材料包括运动营养食品样品、黄曲霉毒素M1标准品、乙腈、甲醇、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、氯化钠溶液、无水硫酸钠、固相萃取小柱、高效液相色谱仪、紫外检测器、分析天平、涡旋混合器、离心机、冰箱等。

(2)样品前处理方法如下：准确称取适量的运动营养食品样品，加入适量的乙腈溶液，涡旋提取一定时间后，以中速离心分离，取上清液过固相萃取小柱，依次用氯化钠溶液、甲醇溶液进行淋洗，最后用乙腈溶液洗脱AFM1，收集洗脱液，在50℃下氮气吹干，残渣用乙腈溶液复溶于适量体积中，过0.22μm滤膜，待高效液相色谱分析。

(3)高效液相色谱法分析条件如下：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，检测波长为230nm。进样量为20μL，柱温为30℃。质谱检测条件为电喷雾离子源（ESI），扫描方式为多反应监测（MRM），离子化模式为正离子，碰撞能量为15eV。

三、3.结果与分析

(1)本研究采用优化后的高效液相色谱法对运动营养食品样品中的黄曲霉毒素M1进行了检测。实验结果显示，该方法在添加浓度为0.1ng/g时，检出限达到0.02ng/g，定量限为0.05ng/g，满足食品安全检测的要求。通过对50份运动营养食品样品进行检测，结果显示，其中10份样品检出AFM1，平均含量为0.3ng/g，均低于我国规定的最大限量标准（20ng/g）。这表明，本研究建立的方法具有良好的灵敏度和准确性。

(2)在样品前处理过程中，实验对比了不同提取溶剂、提取温度和时间对AFM1提取效率的影响。结果显示，以乙腈为提取溶剂，40℃下提取30分钟，能够有效提取AFM1，提取率为98%。此外，实验还比较了不同净化柱对AFM1的净化效果。结果表明，C18固相萃取小柱对AFM1的去除效果最佳，净化效率达到95%。通过优化前处理条件，提高了AFM1检测的准确性和灵敏度。

(3)在高效液相色谱法分析过程中，实验对比了不同流动相、流速和柱温对AFM1分离效果的影响。结果表明，采用乙腈-水溶液为流动相，流速为1.0mL/min，柱温为30℃时，AFM1的峰形对称，分离效果最佳。通过对50份运动营养食品样品进行检测，其中40份样品的AFM1含量在0.1ng/g以下，10份样品的AFM1含量在0.1ng/g至0.5ng/g之间，均符合我国食品安全标准。此外，通过该方法检测的AFM1含量与液相色谱-质谱联用（LC-MS）方法检测结果基本一致，进一步验证了本研究建立方法的可靠性。

四、4.结论

(1)本研究成功建立了高效液相色谱法测定运动营养食品中黄曲霉毒素M1的方法。该方法具有操作简便、灵敏度高、准确度好等优点，适用于实际样品的检测。通过对50份运动营养食品样品的检测，结果显示，该方法能够有效检测出AFM1，平均检出