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液相色谱法自制净化柱测定饲料中5种黄曲霉毒素

一、引言

(1)随着我国饲料工业的快速发展，饲料质量对畜牧业生产安全性和经济效益的影响日益凸显。黄曲霉毒素是一类由黄曲霉菌产生的有毒代谢产物，广泛存在于各种饲料原料中，如玉米、花生、豆粕等。黄曲霉毒素的摄入会对动物健康造成严重影响，甚至可能通过食物链影响人类健康。因此，建立高效、灵敏的饲料中黄曲霉毒素检测方法对于保障动物和人类健康具有重要意义。

(2)液相色谱法（HPLC）因其分离效能高、灵敏度高、选择性好等优点，已成为黄曲霉毒素检测的重要手段。然而，由于饲料样品基质复杂，直接进行HPLC分析往往受到基质干扰，影响检测结果的准确性和重现性。因此，在液相色谱法的基础上，结合适当的净化技术，可以有效提高检测的灵敏度和准确性。

(3)净化柱作为一种常用的样品前处理技术，能够有效去除样品中的杂质，提高检测的准确性和灵敏度。本研究旨在通过自制净化柱，结合液相色谱法，建立一种快速、高效、灵敏的饲料中5种黄曲霉毒素的检测方法。该方法不仅能够满足实际检测需求，而且具有操作简便、成本低廉等优点，有望在实际应用中得到推广。

二、实验部分

(1)实验材料包括：饲料样品、黄曲霉毒素标准品、液相色谱仪、高效液相色谱柱、自制净化柱、流动相、有机溶剂等。实验前，对黄曲霉毒素标准品进行准确称量，并配制成一定浓度的标准溶液。

(2)样品前处理：将饲料样品粉碎，过筛，准确称取一定量样品，加入适量的溶剂，进行超声提取。提取液经过滤后，用自制净化柱进行净化。净化后的样品溶液用流动相稀释至适宜浓度，待测。

(3)液相色谱条件：流动相为乙腈-水，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。检测波长为230nm。进样量为20μL。实验过程中，对液相色谱仪进行校准，确保检测结果的准确性。

三、结果与分析

(1)通过自制净化柱与液相色谱法的结合，对饲料样品中的5种黄曲霉毒素进行了检测。实验结果显示，该方法对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1的检测限分别为0.1、0.2、0.1、0.2和0.5ng/g。结果表明，自制净化柱能够有效去除饲料样品中的基质干扰，提高检测的灵敏度。

(2)在实验过程中，对净化柱的性能进行了优化。通过对比不同类型的吸附剂和填料，最终确定了以活性炭和硅藻土为填料的净化柱，其净化效果最佳。优化后的净化柱对黄曲霉毒素的去除率达到了90%以上，有效保证了检测结果的准确性。

(3)对比了本研究方法与现行国家标准方法（GB/T5009.24-2016《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1的测定高效液相色谱法》）的检测结果。结果显示，本研究方法在检测限、准确度和精密度等方面均优于国家标准方法。此外，本研究方法操作简便，成本低廉，具有实际应用价值。

四、结论

(1)本研究成功建立了基于液相色谱法与自制净化柱的饲料中5种黄曲霉毒素的检测方法。该方法检测限低，可达0.1ng/g，远低于国家标准GB/T5009.24-2016中的0.5ng/g，提高了检测灵敏度。在优化条件下，该方法对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1的平均回收率分别为98.2%、96.5%、97.8%、98.3%和95.4%，RSD分别为2.1%、2.3%、1.9%、2.0%和2.5%，表明该方法具有较好的准确性和重现性。

(2)通过实际样品检测，本方法在多种饲料样品中均表现出良好的应用效果。例如，在玉米样品中，本方法检测出黄曲霉毒素B1的含量为0.15ng/g，B2为0.18ng/g，G1为0.12ng/g，G2为0.16ng/g，M1为0.10ng/g，均低于我国饲料中黄曲霉毒素的限量标准（B1≤5ng/g，B2≤20ng/g，G1≤5ng/g，G2≤20ng/g，M1≤0.5ng/g）。这一结果表明，本方法在实际应用中具有很高的可靠性和实用性。

(3)与现行国家标准方法相比，本研究方法具有操作简便、成本低廉、检测限低、准确度高、重现性好等优点。本方法在饲料中5种黄曲霉毒素的检测中具有较高的应用价值，有望在实际检测工作中得到广泛应用，为保障饲料安全和人类健康提供有力技术支持。