高效液相色谱法测定大豆油中黄曲霉毒素B1的不确定度评定.docxVIP

PAGE

1-

高效液相色谱法测定大豆油中黄曲霉毒素B1的不确定度评定

一、1.测定方法概述

1.高效液相色谱法（HPLC）是一种分离和分析复杂混合物中成分的强大技术，在食品检测领域得到了广泛应用。特别是在测定大豆油中黄曲霉毒素B1（AFB1）的含量时，HPLC因其高灵敏度、高准确度和快速分析等优点而成为首选方法。该方法通常涉及样品的前处理步骤，包括提取、净化和浓缩，以确保目标分析物AFB1能够从复杂的基质中分离出来。具体来说，AFB1的提取通常采用乙腈-水或乙腈-水-盐酸等溶剂，通过液-液萃取或固相萃取技术实现。净化步骤通常使用C18小柱或氧化铝小柱等，以去除干扰物质。浓缩过程则多采用旋转蒸发仪或氮吹仪，将提取液浓缩至一定体积，以便于HPLC分析。

2.在HPLC分析中，AFB1的检测通常采用荧光检测器。该方法基于AFB1在特定波长下具有荧光特性，通过选择合适的激发和发射波长，可以实现高选择性和高灵敏度。例如，AFB1在激发波长为365nm和发射波长为440nm时具有强烈的荧光。在实际操作中，为了保证检测结果的准确性，需要严格控制流动相的组成、流速、柱温等因素。以某研究为例，该研究采用C18色谱柱，以乙腈-水为流动相，流速为1.0mL/min，柱温设定为30℃，荧光检测器检测限可达0.5ng/mL，回收率在80%-110%之间，变异系数（CV）小于10%。

3.为了进一步确保测定结果的可靠性，通常需要对HPLC系统进行校准和验证。这包括标准曲线的制作、样品加标回收实验、重复性实验等。以某实验室为例，该实验室采用AFB1标准品，制备了5个浓度的标准溶液，线性范围为0.05-50ng/mL，相关系数（r2）大于0.99。在加标回收实验中，向空白大豆油样品中加入不同浓度的AFB1标准品，结果表明，加标回收率在90%-105%之间，CV小于15%。此外，实验室还进行了重复性实验，对同一批样品进行多次测定，结果表明，CV小于5%，进一步验证了HPLC方法在测定大豆油中AFB1含量的可靠性。

二、2.不确定度来源分析

1.在高效液相色谱法测定大豆油中黄曲霉毒素B1的不确定度评定过程中，不确定度来源主要分为几个方面。首先，是仪器设备的不确定度，包括色谱仪、检测器和数据处理系统的误差。例如，色谱柱的柱效和保留时间的不确定性可能会影响分析结果。以某实验室为例，其色谱柱的理论塔板数在20000以上，但保留时间的不确定度仍可达±0.5分钟。

2.样品制备过程中的不确定度也是不可忽视的。这包括提取、净化和浓缩等步骤中使用的试剂、溶剂和设备带来的不确定度。例如，提取溶剂的纯度、净化柱的吸附容量以及浓缩过程中溶剂的蒸发量都会对最终结果产生影响。据某研究报道，样品提取过程中，由于溶剂纯度不稳定，导致提取效率的不确定度可达±10%。

3.测定过程中的操作人员主观因素也会引入不确定度。这包括取样、加样、进样和数据处理等操作过程中的误差。例如，取样过程中的代表性误差和操作人员在加样时对体积的读数误差都可能对结果产生影响。一项针对操作人员误差的研究表明，在加样过程中，由于人为操作误差，体积的不确定度可达±2%。此外，数据处理过程中由于计算方法或软件问题也可能引入不确定度。

三、3.不确定度分项评定

1.在高效液相色谱法测定大豆油中黄曲霉毒素B1的不确定度分项评定中，首先考虑的是仪器设备的不确定度。这包括色谱仪、检测器和数据处理系统的校准误差、漂移以及重复性。以某型号的高效液相色谱仪为例，该仪器的基线漂移在连续运行24小时内不超过0.5mAU，重复性实验表明，在相同条件下，连续进样10次，峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.2%。此外，检测器的灵敏度对于黄曲霉毒素B1的检测至关重要，假设检测器的灵敏度设定为0.5ng/mL，那么在检测低浓度样品时，其不确定度主要由检测器的响应线性决定，根据仪器制造商提供的数据，该线性范围内的不确定度为±5%。

2.样品制备过程中的不确定度评定是另一个重要环节。这包括样品提取、净化和浓缩等步骤。例如，在提取过程中，假设使用的是固相萃取小柱，其吸附容量可能存在一定的不确定性。根据小柱制造商提供的数据，小柱的吸附容量不确定度为±10%。在净化步骤中，使用C18小柱进行净化，其保留时间的不确定度可能达到±2分钟，这会影响样品中目标成分的回收率。浓缩过程中，使用旋转蒸发仪时，溶剂的蒸发量可能受到温度和压力的影响，假设蒸发量不确定度为±5%，这将直接影响到最终样品的浓度。

3.操作人员的不确定度评定通常涉及取样、加样、进样和数据处理等环节。取样过程中，样品的代表性可能会因为取样方法不当而引入不确定度，假设样品代表性不确定度为±5%。在加样操作中，由于操作人员的视觉误差，可能导致加样体积的不确定度为±2%。进样时，样品