动物繁殖新技术讲座.ppt

胚胎的鉴定及分级（三）采卵孵育胚：一般在发情后9～11d，由于胚泡腔继续扩张，致使透明带破裂，卵细胞脱出。010102凡在发情后第6～8d回收的16细胞以下的受精卵均应列为非正常发育卵，不能用于移植或冷冻保存02动物胚胎移植技术供体牛的选择供体牛的饲养超数排卵处理胚胎的鉴定和分级采卵检卵胚胎的移植妊娠诊断第四节牛的胚胎移植牛的胚胎移植一、供体牛的选择1.应符合本品种标准，具有较高的生产性能。～8岁，体格健壮，无遗传性疾病，繁殖机能正常。3.产犊记录清楚，无流产史，产后有两次正常发情记录。4.生殖器官正常，无繁殖疾病。5.重复超数排卵间隔60d左右。最多连续处理4次后，自然繁殖后再使用。凡2次超数排卵反应差的母牛不再用作供体。6.供体牛的超数排卵处理应在情期的第9～13d进行。凡黄体发育不良，卵巢静止的母牛不宜用。7.应选择性情温顺的母牛作供体，以便于操作。供体牛的饲养管理良好的营养状况:要保证给供体牛足够的优质干草、青贮或多汁饲料、精料以及维生素和矿物质，并供给清洁的饮水和盐，做到合理饲养，精心管理。供体牛在采卵前后要特别注意保持良好的饲管环境，不得任意变换饲草；饲料和管理程序，避免因过强的应激所造成的神经紧张状态。牛的胚胎移植三、超数排卵处理牛的胚胎移植促卵泡素(FSH)减量注射法：供体牛在发情后的9～13d肌注FSH，早晚各一次，间隔12h，分4d减量注射。在第3d时同时宫注PGF2α2.0～2.4mg或氯前列烯醇0.6mg。如使用国产FSH总剂量为325单位时，处理方法如附图所示。超排剂量根据不同厂家激素确定适宜剂量，国产激素320～360单位，进口激素28～36mg。01超数排卵处理021.FSH法激素的选择与鉴定牛超数排卵示意图超数排卵处理01孕马血清促性腺激素(PMSG)处理法02在情期的11～12d，一次肌注PMSG2500～30001U，48h后宫注PGF2α2.4mg。发情后约18h肌注等量的抗PMSG。超数排卵处理2.PMSG法发情观察和配种1PGF2α处理后40～48h，大部分处理牛发情。通常要求从注PG第2d傍晚开始观察发情，至少早晚各观察一次。在观察到接受爬跨后4～6h进行第一次输精，间隔12h后第二次输精。每次有效精子数不得少于50×106，输入两侧子宫角或子宫体。注意输精时不得触摸卵巢。2超数排卵处理四、采卵牛的胚胎移植以发情日为第0d，在第5～6d检查卵巢确定黄体数，以便于安排受体头数。第7d(或第6～8d)非手术回收卵。1采卵21．采卵时间灭菌处理过的冲卵管用PBS液冲洗2～3次，插入钢芯，检查气球。在无菌间用导管连接吊瓶和集卵杯灌流装置。装入PBS液的吊瓶在37℃水浴中预温待用。准备好必要的麻醉剂、注射器、酒精棉球和冲洗消毒剂等。采卵122．器械和冲卵液的准备3．供体牛的保定和麻醉（三）采卵供体牛保定完毕后，在第一、二尾椎骨间酒精消毒，用2%普鲁卡因3～5ml作硬膜外麻醉，或肌注2%静松灵lml。采卵12麻醉后将牛尾竖直绑在保定架上，清除粪便，用清水冲洗会阴部及外阴，再用高锰酸钾液冲洗消毒，用灭菌卫生纸擦干，最后用酒精棉球消毒外阴部。采卵124．外阴清洗、消毒5．冲卵管的插入和冲卵部位（三）采卵助手将准备好的冲卵管交给术者的右手，术者左手食指和拇指压开阴门插入冲卵管，再将左手伸入直肠，仔细小心地诱导冲卵管经子宫颈进入一侧子宫角至大弯处，抽出少许钢芯，再将冲卵管向前推，使其尖端靠近子宫角深部。由助手持30ml注射器一次推入10ml空气，然后按术者要求，以1ml计数充气。根据子宫大小及冲卵管在子宫的位置确定充气量，一般青年牛充气14～16ml，经产牛为18～25ml。冲卵管固定后抽出钢芯，开始灌流。采卵6．灌流方法（三）采卵将吊瓶挂在距外阴部1.0m高处，接通三通管(Y型)和冲卵管。术者用右手控制进流和出流开关，每次灌注30～50ml，由少到多，每侧总量为300～500ml。左手通过直肠辅助按摩子宫角。每侧子宫角冲8～10次。或者用50ml注射器，每次注入30～50ml的PBS冲卵液，分次冲洗子宫角，回收后注入加盖量筒。另一侧子宫角的冲洗是由术者右手拉直冲卵管，助手小心插入钢芯。术者的左手在直肠内诱导钢芯插稳后，给气球放气。术者再将冲卵管插入另一侧子宫角，用同样的方法冲洗。全过程需在室温(20℃左右)操作。采卵采卵7．术后处理（三）采卵两侧子宫角冲卵完成后，从气球放出一部分空气，将冲卵管抽至子宫体灌注土霉素溶液(3g土霉素粉溶于100ml灭菌双蒸水或生理盐水)或