中检院送检细胞制剂检定项目SOP（最全）(1).doc

中检院送检细胞制剂检定项目SOP目录

1.人脐带间充质干细胞P4代成品细胞质量标准 2

2.细胞流式检测标准操作程序 4

3.逆转录病毒PERT法检测标准操作程序 8.

4.细胞基因组DNA提取操作标准流程 10

5.细胞基因组RNA提取操作标准流程 12

6.病毒PCR法检测标准操作程序Ⅰ 1.4

7.病毒PCR法检测标准操作程序Ⅱ 1.6

8.hUCMSCs免疫学反应检测标准操作程序 19

9.hUCMSCs成骨诱导分化标准操作程序 21

10.hUCMSCs成脂诱导分化标准操作程序 22

11.细胞计数台盼蓝染色法标准操作程序 25

12.细胞周期检测标准操作程序 26

13.hUCMSCs端粒酶检测标准操作程序 28

14.hUCMSCs软琼脂克隆形成实验标准操作程序 31

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1

人脐带间充质干细胞P4代成品细胞质量标准

检测项目【生物学属性】

细胞形态

细胞计数STR图谱

细胞活率

细胞表面抗原分析CD90CD73CD105CD44CD166CD45CD34

细胞表面抗原分析

【微生物学安全性检查】

无菌需氧菌及真菌厌氧菌及真菌

无菌

内毒素支原体

逆转录病毒HIV-1

HBVHCVHCMV EBVHPV

人细小B19病毒HHV6/7

HTLV

猪细小病毒猪细环病毒猪圆环病毒

检测方法

镜检

细胞计数仪检测

多重PCR复合扩增系统检测

细胞计数仪检测

流式细胞术（FCM）

全自动血培养仪监测系统检测

凝胶法培养法

PERT法检测逆转录酶活性荧光PCR核酸检测

荧光PCR核酸检测荧光PCR核酸检测荧光PCR核酸检测荧光PCR核酸检测荧光PCR核酸检测荧光PCR核酸检测

PCR核酸检测PCR核酸检测PCR核酸检测PCR核酸检测PCR核酸检测

标准规定

细胞贴壁生长时，呈梭形，应为成纤维样细胞

标示量的90%～120%

无交叉污染不低于85%不低于95%不低于95%不低于95%不低于95%不低于95%不得过2%不得过2%不得过2%不得过2%不得过2%

阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性

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2

牛副流感病毒牛腺病毒

牛细小病毒

牛腹泻病毒牛呼肠孤病毒

【生物学活性检查】

诱导分化能力检测成瘤性检测

PCR核酸检测PCR核酸检测PCR核酸检测PCR核酸检测PCR核酸检测

成骨成脂诱导分化染色法软琼脂克隆生长试验

阴性阴性阴性阴性阴性

具有成骨成脂诱导分化潜克隆形成

3

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细胞流式检测标准操作程序

1目的：对细胞表面抗原进行流式鉴定，保证检测的准确性。

2范围：细胞流式检测的全过程

3责任人：技术部

4内容

4.1仪器和试剂

4.1.1仪器设备：流式细胞仪（FACSCaliburTM）、台式离心机、1000μL微量移液枪、100μL微量移液枪、10μL微量移液枪。

4.1.2试剂以及耗材：FITC单克隆抗体、APC单克隆抗体、PE单克隆抗体、PerCP单克隆

抗体、相应的同型对照；1XPBS；鞘液专用流式管、枪头。

4.1.3样本准备

4.1.3.1将样本按条码号顺序排列好，每份样本按照检测抗体种类的需要取流式专用管若

干支，分别标记好单阳管、阴性管、同型对照管和样本检测管。

4.1.3.2各取100μL样本加入标记好的流式管中，然后根据流式管标记的信息分别添加对

应的抗体。充分混匀，置4℃冰箱避光孵育30分钟。

4.1.3.5孵育结束以后加入1mlPBS，充分混匀，1200rpm离心5分钟。

4.1.3.7弃上清液，加入300μLPBS。充分混匀，随后上机检测。

4.2仪器开机程序

4.2.1依次打开稳压电源，主电源，流式细胞仪电源，计算机。

4.2.2开启电脑，在出现的密码登录框中，输入BDIS，按Enter。

4.2.3打开鞘液筒抽屉，检查鞘液筒和废液筒存液情况，鞘液筒空则需要加液，废液筒满则取

出倒除，检查管路是否有气泡，否则应排除，没有问题以后，打开鞘液压力开关。

4.2