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医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序--第1页

XX医院核酸扩增荧光检测编号：C009

临床基因扩增实验和结果分析第一版

检测实验室标准操作程序第1页共4页

医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序

1目的

保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2使用范围

使用LightCycler型扩增仪的核酸扩增荧光检测实验室。

3操作人

XXX

4标准程序

4.1核酸提取、纯化、扩增、产物分析的具体操作见项目SOP

文件及仪器使用SOP文件；

注：目前，SOP文件的主要依据是生产厂家提供的检测试

剂盒说明书。

4.2核酸提取、纯化、加模板在样本处理区完成；

4.3扩增反应体系的配制、分装在试剂处理区进行；

4.3制备好的扩增混合液由传递窗转移至扩增区，上机扩

增；

4.5扩增程序的编程：日常检测活动中，操作者必须遵循仪

器使用SOP文件规定的路径。编程或修改路径参照仪器

说明书；

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4.6标本标识的传递：以标本唯一性标识中的“序列号”作

为检测过程中的“检验号”进行传递；

4.7工作安排：每一项目每周至少完成一个批次的检测；

4.8在移取所需体积的血清及痰液后，立即盖紧原始标本管

盖，将标本继续保存于-20℃冰箱；

4.8.1原始标本保存一周后丢弃；

4.8.2如患者及医生对标本结果有异议，则需在一周内及时

提出意见，以便重新检测复核结果；

4.9结果分析标准程序

对于LightCycler结果曲线的分析，应按以下步骤进行：

全部曲线——阴性对照——阳性对照——阳性室内质控品

——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）

——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登

记，发报告。

4.9.1整体曲线的观察

将所有曲线选中进行整体观察

a）观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），

特别应注意大量曲

线在同一Ct值出现上涨的情况。

b）观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成

的异常曲线。

4.9.2阴性对照的分析

阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知

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阴性标本。

作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。

4.9.3阳性对照的分析

阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知

阳性标本。

作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴

性的出现。

4.9.4阳性室内质控品的分析

阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理

的已知或未知浓度的阳性室内质控血清。

作用：用以监控日常实验的精密度。

4.9.5阳性标