《茶树菇液体菌种制备操作规程》.docxVIP

1

DB36/XXXXX—2022

茶树菇液体菌种制备操作规程

1范围

本文件规定了茶树菇(Cyclocybecylindracea)液体菌种生产的规范性引用文件、术语和定义、生产技术要求、摇瓶液体菌种生产技术、发酵罐液体菌种生产技术、放罐接种、液体菌种储藏、记录和存档。

本文件适用于人工控制条件下茶树菇液体菌种的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB150.2压力容器第2部分：材料

GB5749生活饮用水卫生标准GB/T12728食用菌术语

GB50073洁净厂房设计规范

NY/T2375食用菌生产技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

茶树菇ChaShuGu

是柱状环伞与茶薪菇、杨树菇、杨柳田头菇的统称，又称茶薪菇、茶树菇、油茶菇、柱状环伞，隶属于真菌界(Fungi)，担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，伞菌亚纲(Agaricomycetidae)，伞菌目(Agaricales)，球盖菇科(Strophariaceae)，圆盖伞属(Cyclocybe)。

3.2

液体菌种liquidspawn

用于生产和销售的菌丝体及其生长基质组成的液体繁殖材料，包括摇瓶液体菌种、发酵罐液体菌种。3.3

液体菌种发酵罐cultivationapparatusforliquidspawn

进行液体菌种培养的专用设备。3.4

液体菌种接种器liquidinterfacetrapinoculator

2

DB36/XXXXX—2022

将液体菌种从发酵罐中按无菌操作要求转接到固体培养基物料中的设备。3.5

固体专用种solidspecialspawn

在玻璃试管/平皿上固体培养基内生长的菌丝体纯培养物，专供接入液体培养基使用。

4生产技术要求

4.1液体菌种生产厂房

4.1.1液体菌种生产场址要求

液体菌种生产厂房设计达到GB50073的规定。液体菌种生产场址应建在交通方便，水源和电源充足，无有害气体、烟雾、灰沙，远离垃圾场、畜禽场舍等有污染的地方，且道路路面硬化、排水良好。

4.1.2液体菌种生产车间要求

4.1.2.1液体菌种生产车间地面应能防水、防滑、防腐蚀、防渗漏、易清洗，有适当的排水坡度（1.0%-1.5%）和良好的排水系统，排水沟应是圆弧似的明沟。墙壁和天花板应能防水、防潮、防霉、易清洗。门窗应设置防蚊蝇纱网。车间入口处应设置洗手消毒和干手设施。车间安装排水管道或者排风设备，设封闭式废物桶。

4.1.2.2发酵间、接种间按照GB50073执行。液体菌种接种间应设置缓冲间。灭菌间、冷却间、培养间符合NY/T2375的规定。

4.2生产设备与设施

4.2.1主要生产设备

包括液体菌种发酵罐、显微镜、磁力搅拌机、空气压缩机、高效空气过滤器、液体菌种接种器、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温摇床、恒温培养箱、除湿机、玻璃三角瓶、玻璃平皿。液体菌种发酵罐、高压蒸汽灭菌锅和蒸汽锅炉应符合GB150.2的规定；高效空气过滤器对粒径0.1μm-0.2μm-粒子的补集效率在99.99%以上，玻璃三角瓶容积500ml-1000ml，两者均耐121℃高温灭菌。

4.2.2主要基础设施

液体菌种生产车间应包含配料间、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、发酵室、化验室、菌种室等，并配备相应设施设备。

4.3培养原料

化学试剂类、生物制剂及天然材料类应符合NY/T2375要求，同时水不溶物物料需过140目筛。

4.4生产起始菌种

生产起始菌种使用固体专用种，即挑取试管斜面保存的茶树菇菌块转接至PDA平板中央，26℃条件下静置培养，待长满平板后的菌种，应符合NY/T2375要求，术语符合GB/T12728的规定。

5摇瓶液体菌种生产技术

3

DB36/XXXXX—2022

5.1液体培养基配方及制作

5.1.1液体培养基配方

种子液培养基（摇瓶一级种）配方：马铃薯20%、葡萄糖2%、牛肉膏0.2%、蛋白胨0.1%、KH2PO40.1%、MgSO40.1%、余量为水，pH自然。

摇瓶二级种培养基配方：玉米粉3%、黄豆饼粉0.3%、KH2PO40.05%、MgSO40.15%、余量为水，pH自然。

5.1.2