《阴生观赏植物组培快繁技术规范》.docxVIP

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阴生观赏植物组织培养快繁技术规范

1范围

本文件规定了阴生观赏植物组织培养的基本要求、培养基配置、培养材料与外植体灭菌、接种操作、组培苗移栽和培育、种苗质量、包装、标签和运输。

本文件适用于红掌、白掌、竹芋、绿萝等阴生观赏植物组培种苗繁殖活动。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T496肥料合理使用准则通则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

外植体

从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。

3.2

组培苗plantlet

利用植物的组织、器官或细胞等作为起始材料，通过植物组织培养方式生产获得的植株。

3.3

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组培穴盘苗plugplant

移栽到穴盘中培育的组培苗。

3.4

琼脂苗inagarplantlet

生长在固体培养基（凝固剂一般为琼脂）的组培生根苗。

3.5

无琼脂苗ex-agarplantlet

从培养容器中取出并洗去表面培养基的组培生根苗。

4基本要求

4.1人员要求

4.1.1工作人员应经过培训获取上岗资格。

4.1.2接种人员应在更衣室更换拖鞋、穿白大褂（或接种服），戴上帽子和口罩后进入接种室（或经

过风淋室后进入接种室），操作前和操作中经常用75%酒精棉球擦手。

4.2设施要求

应配备洗涤室、培养瓶晾干室、试剂室（称量室）、培养基配制室、高压灭菌室、培养基储存室、更衣室、接种室、培养室、出苗室和贮物室等。

4.3设备、仪器要求

应配备高压灭菌器、紫外灯、臭氧发生器、电子天平、pH计、冰箱、微波炉、超净工作台、微量移液器、接种器具（电热杀菌器）、石英玻璃珠、枪状镊子、手术刀柄刀片、切割碟子、温度计、光照培养箱、培养架（包括日光灯）、调速振荡器、组培瓶、试管、盛装器皿（烧杯、试剂瓶等）、计量器皿（量筒、容量瓶等）以及其他常用消耗品等。仪器设备应符合GB19489的规定。

5培养基配置

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5.1培养基选择

根据培养材料及培养目的选择合适的基本培养基和植物生长调节剂种类及浓度配比。

5.2化学试剂选择和保存

5.2.1试剂在使用前目测应无异物、异色或者吸湿结块。

5.2.2试剂标签完整，并在有效期内。

5.2.3试剂应按试剂说明要求存放。

5.3基本培养基母液配置和保存

5.3.1母液配制应用蒸馏水或去离子水。

5.3.2母液配好后容器上应贴好标签，注明名称、浓度、配制日期。

5.3.3发现标签不明、有沉淀、浑浊或变色现象的母液应停止使用。

5.4植物生长物质母液配置

植物生长物质的母液配制应符合接种植物的生长特性需求，母液配制好后贴好标签，按规定要求保存，保存期应不超过2个月。

5.5培养基制作

5.5.1依据培养基成分准备好蒸馏水、蔗糖、琼脂和各类母液。

5.5.2加适当比例的水，再加琼脂粉放入锅中加热搅拌使其融化。

5.5.3琼脂粉融化后，加入蔗糖，搅拌使蔗糖溶解。

5.5.4蔗糖溶解后，停止加热，放入吸取的各类母液，并充分搅拌。搅拌均匀后，加入蒸馏水混合定

容并搅拌均匀。

5.5.5定容后，根据不同定量分装，每瓶30m1～40ml，盖好瓶盖或用封口膜封口。

5.6培养基消毒灭菌

将分装好的培养基、蒸馏水、接种器械、无菌纸、工作服、口罩、帽子等放入高压蒸汽灭菌锅内，采用湿热空气灭菌法（灭菌压力0.11MPa～0.14MPa、温度120℃~126℃、时间15min～20min）进行灭菌。培养基高压灭菌取出后，置于室温至培养基凝固后即可使用。

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6培养材料与外植体灭菌

6.1培养材料选择

选择观赏性状好、生长健壮、无病虫害、花期长的优良的品种，并选用带芽茎段为外植体。

6.2外植体灭菌

选择生长健壮的带芽茎段，在自来水下冲洗20min。在无菌室内把嫩茎放入75％的酒精中浸泡20s，用无菌水冲洗一遍，再用10％的次氯酸钠浸泡8min～10min，然后用无菌水冲洗6遍～7遍，用无菌滤纸吸干水分。

7接种操作

7.1接种准备

7.1.1接种人员在接种之前应准备酒精灯或电热灭菌器、酒精、无菌脱脂棉或纱布以及接种器械、培

养基、接种用苗等。

7.1.2超净工作台（或洁净无菌接种室