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天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
临床微生物检测的基因同源性分析
??????医院感染的流行病学研究是临床微生物学工作者的重要课题，在医院感染
监测的研究中，一个很重要的问题就是如何确定感染途径和传播途径，以采取有
效预防和控制措施，从而防止医院感染或者暴发流行，因此对微生物鉴定和菌株
同源性分析提出了更高的要求。
??????目前，传统的细菌鉴定和同源性分析技术已不能很好地满足医院感染诊断
和流行病学调查的需要，从型、亚型、株，甚至分子水平上去认识细菌变得愈来
愈重要了。近年来分子生物学的理论和技术在细菌感染诊断中的渗透和广泛应
用，使得细菌鉴定、耐药基因的检测、分子流行病学调查变得更加准确、简洁和
快速。细菌DNA?同源性分析技术如脉冲场凝胶电泳、聚合酶链反应、DNA?探
针杂交以及序列分析等方法是目前在分子水平上分析细菌的主要手段，它在鉴定
细菌感染的爆发、确定院内交叉感染、感染病原菌之间的基因同源性等方面有着
重要的作用，本文将对常用基因同源性分析方法的机理和过程做简要综述。
?一、质粒分型(Plasmid?profile?assay)：
1、原理：
?????质粒是可移动的染色体外元件，可以自发丢失或者被宿主稳定地获得，因
此流行病学上相关的分离菌株有可能表现出不同的质粒图谱。把质粒提取出来，
进行常规的琼脂糖电泳分析，就可以知道分离菌株携带质粒的大小和数目。
天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
3、实验方法的评价：
???优势：
?????????a.步骤比较简单，对实验仪器要求不高。
?????????b.在评价那些从局限的时间和地点（如一个医院中的急性爆发）分离
出来的菌株非常有效。
???缺点：
??????????a.实验结果的重复性不好。
??????????b.分辨力不高。
?二、染色体DNA的限制性内切核酸酶分析
(Restriction?Endonuclease?Assay?REA)
1、原理：
????限制性内切核酸酶（REA）在特异的核酸识别序列切割DNA，DNA被消化
后，所得到的限制性片段的数目和大小是由酶的识别位点和DNA的组成共同决
定的。在传统的限制性内切核酸酶分析中，人们用含有相对多的限制性位点的内
切核酸酶消化细菌的DNA，这样就会得到成百上千条长度在0.5-50Kb范围内的
DNA片段。恒定的电场琼脂糖电泳，可以根据分子质量的大小将这些DNA片段
分开，然后通过EB染色并在紫外灯下观察其图谱。同一种的不同分离菌株的
天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
DNA序列的变异可造成限制性位点数目和分布的变化，所以可以导致其REA图
谱出现差异。
2、实验流程：a.染色体DNA抽提；b.限制性内切酶消化DNA（主要是Hind?
染色、凝胶成像。
3、实验方法的评价：
??优势：?
???????a.实验流程简单。
???????b.所有的菌株都可以这个方法来分型。
???缺点：
???????a.REA图谱包括成百上千条带，一些条带可能不能检测到，一些条带可
能会重叠。?
???????b.REA图谱分析复杂。
???????c.分辨力不高。
三、染色体DNA的脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field?Gel?Eelectrophores
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