细胞凋亡与衰老.ppt

细胞衰老

(cellularaging或cellsenescence)●Hayflick界限(HayflickLimitation）●细胞在体内条件下的衰老●衰老细胞结构的变化●细胞衰老的分子机理第23页，共33页，星期日，2025年，2月5日复制性衰老（replicativesenescence）细胞的增殖次数是有限的，称“Hayflick”界限。如人胚成纤维细胞可培养60-70代。DNA每复制一次端粒就缩短一段，到一定程度时，则激活DNA损伤检验，细胞凋亡。人的成纤维细胞端粒每年缩短14-18bp。端粒酶可修复端粒，此酶仅在干细胞中表达。第24页，共33页，星期日，2025年，2月5日第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日概念：细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程，也常常被称为细胞程序死亡（programmedcelldeath，PCD）。凋亡细胞将被吞噬细胞吞噬。第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡的生理和病理学意义生理学意义1.生长发育：组织与器官的塑造（趾的分化）；动物变态；皮肤角质形成；2.免疫细胞分化：克隆选择；3.防御：清除衰老细胞、DNA损伤的细胞、和被病原体感染的细胞。第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日病理学意义1.病原体侵染；诱导凋亡——HIV抑制凋亡——Poxvirus2.细胞凋亡不足肿瘤，自身免疫疾病；3.细胞凋亡过度神经退行性疾病（AD，帕金森症）、心肌梗塞、再生障碍性贫血、骨组织坏死。第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日诱导细胞凋亡的因子◆物理性因子，包括射线（紫外线，?射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等◆化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡的检测方法1.形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察2.DNA电泳——ladder3.流式细胞技术4.彗星电泳法（cometassay）5.AnnexinV检测细胞膜外表面PS(磷脂酰丝氨酸)6.TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日区别点细胞凋亡细胞坏死起因生理或病理性病理性变化或剧烈损伤范围单个散在细胞大片组织或成群细胞细胞膜保持完整，一直到形成凋亡小体破损染色质凝聚在核膜下呈半月状呈絮状细胞器无明显变化肿胀、内质网崩解细胞体积固缩变小肿胀变大凋亡小体有，被邻近细胞或巨噬细胞吞噬无，细胞自溶，残余碎片被巨噬细胞吞噬基因组DNA有控降解，电泳图谱呈梯状随机降解，电泳图谱呈涂抹状蛋白质合成有无调节过程受基因调控被动进行炎症反应无，不释放细胞内容物有，释放内容物。第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日常用检测细胞凋亡的染料：二乙酸荧光素（FDA），绿色荧光，活细胞染色。Hoechst33342或33258，DAPI，吖啶橙（AO），半通透，凋亡和固定后的细胞荧光较强。溴化乙啶（EB）、碘化丙啶（PI）、放线菌素D（7-AAD），不通透，正常和凋亡细胞拒染。可用不同性质的染料对凋亡细胞进行双染色。第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡的分子调控机理线虫(C.elegans)凋亡研究发现ced3,ced4基因促进细胞凋亡，ced9基因阻止ced3/ced4的激活，抑制细胞凋亡。 第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日Caspase家族与凋亡◆Caspase家族Caspase活性位点是半胱氨酸(Cysteine)，裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽键，因此称为Cysteineasparticacicspecificprotease，即Caspase.Caspase1即ICE(白介素-1b转换酶),是Ced3在哺乳动物细胞中的同源蛋白.第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日Caspase家族与凋亡Caspase自身以非活化的Procaspase存在，其激活依赖于其他的Caspase在它的天冬氨酸位点裂解活化或自身活化Caspase活化第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日胞外信号分子诱导的细胞凋亡途径当细胞接受凋亡信号分子(Fas,TNF等)后，凋亡细胞表面信号分