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真菌性皮肤病实验报告

一、实验目的

(1)本实验旨在通过对真菌性皮肤病的检测与分析，深入了解真菌感染在皮肤疾病中的诊断与治疗原则。通过对实验样本的采集、处理和显微镜观察，验证真菌性皮肤病的病原学特征，为临床诊断提供依据。

(2)通过本实验，我们将学习真菌性皮肤病的实验室诊断技术，包括病原真菌的培养、鉴定以及药敏试验等，从而提高对真菌性皮肤病病原微生物的识别能力。同时，实验过程中对实验结果的详细记录与分析，有助于培养严谨的科学态度和实验操作技能。

(3)本实验还将探讨不同真菌性皮肤病之间的差异性，以及不同病原真菌对药物敏感性差异，为临床治疗提供参考。通过对比实验组和对照组，验证实验方法的有效性和可靠性，为今后类似实验研究奠定基础。

二、实验材料与仪器

(1)实验材料方面，本实验选用了一组真菌性皮肤病患者的外部病变组织样本，共计30份，其中包括足癣、体癣、股癣等不同类型的真菌感染。样本均由临床科室提供，并经过严格的病原学筛选。此外，实验中还使用了5种不同类型的病原真菌菌株，包括红色毛癣菌、白色念珠菌、须癣毛癣菌等，这些菌株均经过纯化培养，以确保实验的准确性。同时，实验中还使用了1%的KOH溶液用于样本的初步处理，以及10%的NaOH溶液用于病原真菌的培养。

(2)实验仪器方面，本实验配备了生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、显微镜、恒温培养箱、离心机、PCR仪等。生物安全柜用于样本的采集和操作，以确保实验过程中的生物安全。高压蒸汽灭菌器用于实验材料的灭菌处理，以消除实验过程中的污染风险。显微镜用于病原真菌的观察和鉴定，具有高倍放大功能，能够清晰地观察到真菌的形态特征。恒温培养箱用于病原真菌的培养，温度控制在25-28℃，湿度控制在90%以上。离心机用于样本的分离和纯化，转速可调，最高转速可达15000r/min。PCR仪用于病原真菌的DNA提取和扩增，具有快速、高效的特点。

(3)实验试剂方面，本实验使用了10种试剂，包括10%的甲醛溶液、1%的氯化钠溶液、10%的氢氧化钠溶液、1%的氢氧化钾溶液、0.1M的磷酸盐缓冲液、0.5M的EDTA溶液、0.5M的NaOH溶液、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒等。甲醛溶液用于固定样本，氯化钠溶液用于配制生理盐水，氢氧化钠和氢氧化钾溶液用于病原真菌的培养，磷酸盐缓冲液用于配制培养基，EDTA溶液用于DNA的提取，NaOH溶液用于PCR反应的终止，DNA提取试剂盒和PCR试剂盒用于病原真菌的DNA提取和扩增。所有试剂均为市售分析纯试剂，确保实验结果的准确性。

三、实验方法与步骤

(1)实验开始前，首先对实验环境进行彻底消毒，确保无污染。随后，将采集到的真菌性皮肤病患者病变组织样本进行表面消毒，使用70%的乙醇溶液擦拭样本表面2次，每次30秒。将消毒后的样本放入无菌容器中，标记样本编号。接着，将样本在无菌条件下进行组织块制备，使用手术刀将病变组织切成约1mm3的小块，放入装有1%的KOH溶液的试管中，室温下消化处理30分钟，以破坏组织细胞壁。

(2)消化完成后，将试管中的内容物用无菌生理盐水冲洗3次，每次约5分钟，去除未消化的组织碎片和残留的KOH。冲洗后的样本加入1%的氯化钠溶液，使用离心机以1500r/min的速度离心5分钟，弃去上清液。向沉淀中加入适量的10%的氢氧化钠溶液，制成病原真菌的培养液。将培养液滴加于沙堡培养基上，均匀铺开，放入恒温培养箱中，温度控制在25-28℃，湿度控制在90%以上，培养3-5天，观察病原真菌的生长情况。

(3)在病原真菌生长过程中，定期观察并记录其形态特征，包括菌落大小、颜色、边缘、质地等。待菌落充分生长后，取出部分菌落进行显微镜观察，记录真菌的菌丝形态、孢子形态等特征。同时，对培养出的病原真菌进行纯化培养，将纯化的真菌菌株进行菌落计数，确保实验结果的准确性。在实验过程中，对实验数据进行详细记录，包括菌落生长时间、形态特征、纯化培养次数等，为后续分析提供数据支持。此外，对培养出的病原真菌进行药敏试验，测试其对不同抗生素的敏感性，为临床治疗提供参考。

四、实验结果与分析

(1)在本次实验中，30份真菌性皮肤病患者样本中，共有28份样本成功培养出病原真菌。其中，足癣样本中检出红色毛癣菌18例，体癣样本中检出白色念珠菌8例，股癣样本中检出须癣毛癣菌2例。通过显微镜观察，28例样本中的病原真菌均呈现出典型的菌落特征，如红色毛癣菌的菌落呈红色，白色念珠菌的菌落呈白色，须癣毛癣菌的菌落呈灰白色。在纯化培养过程中，所有样本均成功获得纯化菌株，纯化次数平均为3.5次。

(2)在药敏试验中，对28种抗生素进行了测试，结果显示，红色毛癣菌对酮康唑、特比萘芬等抗真菌药物的敏感性较高，而对氟康唑、伊曲康唑等药物的敏感性较低。白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑等