ELISA检测乙肝抗体培训课件.ppt

ELISA检测乙肝抗体

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ELISA检测乙肝抗体

2/14/2025

肝表面抗体ELISA检测

实验目的

1.掌握ELISA的原理和操作方法。

2.熟悉酶标仪的使用方法。

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ELISA检测乙肝抗体

2/14/2025

免疫标记技术

免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。

细胞1

细胞2

标记物

分类

荧光素

放射免疫技术

放射性核素

免疫荧光技术

酶

免疫酶技术

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免疫酶技术

用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ng—pg/ml。

细胞1

标记物

DH２+H２O２

D+2H2O

酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用

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酶免疫技术

酶联免疫吸附试验

酶免疫组化法

用于检测可溶性抗原或抗体

用于检测组织或细胞表面的抗原

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酶联免疫吸附试验-ELISA

ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物；产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。

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酶联免疫吸附实验—ELISA

实验原理

抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

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ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法有三个必要的试剂：

（1）免疫吸附剂

（2）结合物

（3）酶反应的底物

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ELISA的类型

间接法（测抗体）

双抗体夹心发（测大分子抗原）

竞争发（测小分子抗原）

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竞争法

用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。

这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。

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操作步骤

1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。

2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。

3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀，空白孔不加，置37度温箱30分钟。

4.取出反应板，弃液，拍干。

5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干，重复洗条5次，拍干。

6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。

7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。

待1

待2

待2

阳性

阴性

空白

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