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牛羊布鲁氏菌病临床样品采集技术要点阮生

一、1.样品采集前的准备

(1)在进行牛羊布鲁氏菌病临床样品采集之前，首先要对采样人员进行专业培训，确保他们了解布鲁氏菌病的危害性以及采样过程中的安全操作规程。培训内容包括布鲁氏菌病的病原学特性、传播途径、感染症状、个人防护措施以及采样设备的使用方法。采样人员应熟悉采样点的分布情况，了解牛羊饲养环境，为采样工作做好充分准备。

(2)样品采集前，需对采样工具和设备进行彻底的清洁和消毒处理。常用的采样工具包括无菌试管、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子等。所有采样工具在使用前都应经过高压蒸汽灭菌或化学消毒，确保无任何细菌污染。采样环境应保持清洁卫生，避免外界微生物的干扰。采样人员应穿戴合适的防护服、手套、口罩等个人防护装备，以防感染。

(3)在采样前，应对牛羊进行观察，了解其健康状况，对疑似患病的个体进行重点关注。采集前应对牛羊进行编号，以便对样品进行追踪和管理。对于不同类型的样品（如血液、组织、分泌物等），应选择合适的采集方法和工具。例如，血液样品采集可通过颈静脉采血或耳静脉采血的方式进行；组织样品采集则需在无菌条件下进行解剖，采集病变组织。采样过程中，应严格遵守无菌操作原则，防止细菌污染。

二、2.样品采集方法

(1)样品采集方法在牛羊布鲁氏菌病检测中至关重要。血液样品采集是常用的检测方法之一，一般采用无菌真空采血管进行。例如，在采集牛羊血液样品时，应确保每只动物采血量不超过5%的体液总量。根据不同研究，血液样品的采集量通常在5-10毫升之间。例如，在某项研究中，研究者对100头牛进行了血液样品采集，平均每头牛采集血液量为8.5毫升。在采集过程中，应确保采血管内的抗凝剂与血液充分混合，避免凝血现象发生。

(2)组织样品采集主要用于检测布鲁氏菌病病原体在动物体内的分布情况。例如，在采集牛羊肝脏、脾脏、淋巴结等组织样品时，应在无菌条件下进行解剖。采集组织样品的量通常根据研究目的而定，一般不少于5克。在某项研究中，研究者对30头疑似患病的牛进行了肝脏、脾脏、淋巴结组织样品采集，平均每头牛采集组织样品量为6.8克。在组织样品采集过程中，应注意避免细菌污染，采集后应立即进行固定和保存。

(3)分泌物样品采集主要包括尿液、精液等。尿液样品采集可采用便携式尿液采样器或无菌容器进行。例如，在某项研究中，研究者对100头牛进行了尿液样品采集，平均每头牛采集尿液量为15毫升。精液样品采集通常采用按摩法，将精液收集于无菌容器中。在某项研究中，研究者对50头公牛进行了精液样品采集，平均每头牛采集精液量为40毫升。分泌物样品采集时，应确保容器无污染，避免外界微生物的干扰。采集后，应及时送检，以确保检测结果准确。

三、3.样品采集后的处理与保存

(1)样品采集后，应立即对样品进行适当的处理，以防止病原体的生长和污染。血液样品在采集后应轻轻颠倒试管，以确保抗凝剂与血液充分混合。对于组织样品，应在采集后立即进行固定，通常使用10%的甲醛溶液进行固定，以保持组织形态。固定后的组织样品应放入无菌容器中，并密封保存，以防止细菌和其他微生物的污染。例如，在某研究中，研究者对采集的血液和组织样品进行了及时固定，确保了后续检测的准确性。

(2)处理好的样品需要按照实验室的标准操作程序进行保存。血液样品通常保存在4°C的冰箱中，保存时间不宜超过48小时。如果需要更长时间的保存，可以通过低温冷冻保存，将样品置于-20°C或更低温度的冰箱中，最长保存时间可达数月。在冷冻保存时，应使用标记清晰的容器，并记录样品的详细信息，如采集日期、动物编号等。对于组织样品，固定后的样品应尽快进行切片处理，切片后的组织应保存在干燥的容器中，并置于-80°C的冰箱中保存。

(3)在样品保存期间，应定期检查样品的状态，确保样品的完整性和安全性。对于冷冻保存的样品，应避免频繁的冻融循环，因为这可能导致样品的降解。如果需要从冷冻样品中取出一部分进行检测，应使用无菌的取液器，并在取液后立即将样品重新密封并放回原冷冻环境中。在样品处理和保存过程中，所有操作都应在生物安全柜内进行，以防止实验室工作人员和环境的交叉污染。样品的记录和跟踪也非常重要，确保每个样品都可以追溯到其原始来源和处理历史。