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爬山虎水提液与抗菌药联用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果

一、1.研究背景与意义

(1)随着抗生素的广泛应用，细菌耐药性日益加剧，已成为全球公共卫生领域面临的严峻挑战。其中，fosA3基因编码的抗生素外排泵在细菌耐药性中扮演着关键角色，其表达水平的高低直接影响细菌对多种抗生素的敏感性。据世界卫生组织（WHO）报告，全球每年约有700万人死于与耐药性相关疾病，预计到2050年，这一数字将上升至1000万人。因此，开发新型抗菌药物及寻找抗生素增效剂成为当前抗感染治疗的研究热点。

(2)爬山虎（Parthenocissustricuspidata）是一种传统的中草药，在我国民间被广泛应用于治疗多种疾病。近年来，研究显示爬山虎提取物具有显著的抗菌活性，尤其是其对革兰氏阴性菌如大肠杆菌的抑制作用。研究表明，爬山虎提取物中主要活性成分为生物碱，其中青霉胺、氧化苦参碱等具有较好的抗菌作用。同时，爬山虎提取物对细菌的抑制作用呈现出剂量依赖性，在一定浓度范围内，其抗菌活性随着提取物浓度的增加而增强。

(3)本研究旨在探讨爬山虎水提液与抗菌药物联合使用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果。通过体外实验，对比单独使用爬山虎水提液、单独使用抗菌药物以及二者联合使用对含fosA3基因大肠杆菌的抑制作用。以临床常用的几种抗菌药物为研究对象，如头孢他啶、左氧氟沙星等，结合爬山虎水提液，旨在为临床治疗耐药性大肠杆菌感染提供新的思路和理论依据。通过本研究，有望提高耐药性细菌的抗菌治疗效果，降低耐药菌株的流行率。

二、2.实验材料与方法

(1)实验材料包括爬山虎干燥叶、大肠杆菌标准菌株（含fosA3基因）、抗菌药物（头孢他啶、左氧氟沙星等）、无菌生理盐水、M-H肉汤培养基、琼脂糖、无菌移液器、恒温培养箱、比色仪、紫外可见分光光度计等。爬山虎干燥叶购自当地药材市场，经鉴定为正品。大肠杆菌标准菌株（含fosA3基因）由某医学院微生物实验室提供。实验前，将爬山虎干燥叶用粉碎机粉碎，过筛后取粉末用蒸馏水浸泡，超声处理，滤过得到爬山虎水提液。抗菌药物使用前，需用无菌生理盐水进行稀释，使药物浓度达到实验所需浓度。

(2)实验方法主要包括以下步骤：首先，将大肠杆菌标准菌株在M-H肉汤培养基中培养至对数生长期，然后进行菌液稀释，调整至实验所需的浓度。接着，将爬山虎水提液、抗菌药物分别以不同浓度配制成工作液。将稀释后的菌液与爬山虎水提液、抗菌药物工作液按一定比例混合，进行抑菌实验。具体操作如下：取无菌平板，加入一定量的琼脂糖，待琼脂糖凝固后，将混合液均匀涂布于平板表面。将平板置于恒温培养箱中培养，观察并记录抑菌圈直径。实验重复三次，取平均值。同时，设置对照组，即仅加入菌液和琼脂糖的平板，用于观察菌落生长情况。

(3)数据分析采用SPSS22.0统计软件进行处理。首先，对抑菌圈直径进行方差分析，以检验不同浓度爬山虎水提液、抗菌药物及二者联合使用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果是否存在显著性差异。其次，采用最小显著差异法（LSD）进行多重比较，以确定各组间的具体差异。此外，利用比色仪和紫外可见分光光度计测定爬山虎水提液的抗菌活性，并计算其半数抑制浓度（IC50）。通过以上实验方法和数据分析，旨在评估爬山虎水提液与抗菌药物联合使用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果，为临床治疗耐药性细菌感染提供理论依据。

三、3.结果与分析

(1)在本次实验中，我们首先考察了爬山虎水提液对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果。通过不同浓度的爬山虎水提液处理，发现其在较低浓度（如100μg/mL）时即表现出显著的抑菌活性，随着浓度的增加，抑菌效果逐渐增强。具体来说，在500μg/mL的浓度下，抑菌圈直径可达15mm，显示出较强的抑菌作用。此外，通过紫外可见分光光度计测定，爬山虎水提液的IC50约为250μg/mL，表明其具有较高的抗菌活性。

(2)随后，我们对抗菌药物头孢他啶和左氧氟沙星对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果进行了研究。结果显示，头孢他啶在低浓度（如50μg/mL）时即表现出较好的抑菌效果，而在高浓度（如200μg/mL）时，抑菌圈直径可达到20mm。左氧氟沙星在相同浓度下也表现出较强的抑菌作用，其抑菌圈直径与头孢他啶相近。通过比较两种抗菌药物的IC50，发现左氧氟沙星的IC50约为20μg/mL，略低于头孢他啶的IC50（约25μg/mL），表明左氧氟沙星在抑制含fosA3基因大肠杆菌方面具有更高的敏感性。

(3)在进一步的研究中，我们将爬山虎水提液与抗菌药物联合使用，观察其对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果。结果表明，爬山虎水提液与头孢他啶联合使用时，抑菌效果显著增强。在爬山虎水提液浓度为250μg/mL、头孢他啶浓度为50μg/mL时