细菌生化鉴定技术岳阳王华洪讲解.pptx

细菌生化鉴定技术岳阳职业技术学院王华洪

一、碳水化合物的代谢试验原理：多糖→单糖→丙酮酸→酸性产物(或产气)→pH↓→呈酸性变色(或出现气泡)方法：将待检细菌以无菌操作接种到糖发酵管中，置35℃温箱培养18～24h，观察结果。1、糖（醇、苷）类发酵试验结果

一、碳水化合物的代谢试验原理：根据细菌在分解葡萄糖的代谢过程中对氧分子需求的不同，将细菌分为氧化、发酵和产碱型三类2、O/F试验结果方法：取2支HL葡萄糖培养管煮沸驱氧，冷却后接种细菌。将其中一管敞开，另一管用液体石蜡封管，培养18～24h观察结果（开管和闭管）

3、甲基红试验原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，进一步分解生成大量混合酸，使培养pH下降至4.4以下，加入甲基红后，呈现红色反应。为甲基红试验阳性。方法：将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨水中,35℃培养18~24小时后,往培养基中加入甲基红指示剂少许,观察结果。结果

4、V-P试验原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中，乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与胍基化合物结合，生成红色化合物，是为V-P试验阳性。（甲基红试验阳性其V-P试验通常阴性）方法：把待检细菌接种在葡萄糖蛋白胨水中，35℃培养18~24h后，按每毫升培养液加入0.1ml含2％肌酸或肌酐的40％KOH溶液,数分钟或数小时后观察结果。结果空白对照阴性阳性

5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)而生成黄色的邻硝基苯酚，该试验也称为ONPG试验。方法：将被检制成菌悬液，加入1滴甲苯充分振摇，37℃水浴5分钟，使酶释放，然后再加入0.25mlONPG，混匀后，置于37℃水浴中温育，菌悬液呈黄色为阳性反应。结果阴性阳性

6、七叶苷水解试验原理：某些细菌能分解七叶苷产生葡萄糖与七叶素，七叶素与培养基中的Fe2+结合后，形成黑色的化合物，使培养基变黑。方法：将待检细菌接种到七叶苷培养基上，培养后观察结果，培养基变黑色者为阳性，培养基不变色为阴性。结果+-

二、蛋白质和氨基酸的代谢原理：细菌产生色氨酸酶，分解培养基中色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质，是为靛基质试验阳性。方法：将待检菌接种于蛋白胨水中，35℃培养18～24h，取出后沿试管壁加入靛基质试剂数滴，在两液面观察结果。结果1、靛基质（吲哚）试验

二、蛋白质和氨基酸的代谢原理：细菌产生酶，分解含硫氨基酸生成硫化氢，硫化氢与培养基中的亚铁盐或铅盐结合生成黑色化合物。方法：将细菌穿刺接种到含醋酸铅培养基中，35℃、18～24h，观察结果。结果：黑色管为阳性2、硫化氢试验

二、蛋白质和氨基酸的代谢原理：细菌产生脲酶，水解尿素生成氨和二氧化碳，培养基呈碱性反应方法：将待检菌接种于尿素培养基中，35℃培养18～24h取出观察。结果3、尿素酶（脲酶）试验-+

二、蛋白质和氨基酸的代谢原理：细菌产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁作用，形成绿色化合物方法：将待检菌接种于苯丙氨酸微量培养管中（接种量稍大），培养后在培养基上直接滴加10％氯化铁试剂，出现绿色反应者为阳性。结果4、苯丙氨酸脱氨酶试验-+

三、碳源利用试验原理：有的细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，细菌在生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐，使培养基呈碱性反应方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，培养后观察结果。培养基由淡绿色变为深蓝色者为阳性，培养基中无菌生长、仍为绿色者为阴性。结果枸橼酸盐利用试验+-

四、酶类试验原理：某些细菌具有氧化酶（细胞色素氧化酶），能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化生成红色的醌类化合物。方法：取洁净滤纸条，粘取被检细菌菌落，滴加氧化酶试剂1滴于菌落上。或将试剂直接滴加在被检细菌的菌落上。阳性者立即出现红色，继而变为深红色至深紫色。结果1、氧化酶（细胞色素氧化酶）试验

四、酶类试验原理：细菌产生的触酶（过氧化氢酶）能催化过氧化氢放出初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。方法：取待检细菌少许，置于洁净的载玻片上，滴加3％H2O2试剂1～2滴，观察结果。一分钟内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。结果2、触酶试验（玻片法和试管法）+-

四、酶类试验原理：金黄色葡萄球菌能产生游离型凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白。方法：于3支试管中分别加入1: