临床免疫学免疫诊断技术.pptVIP

临床免疫技术;运用免疫学原理建立的免疫学检测技术应用于：

多种免疫性疾病〔感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反响、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反响和肿瘤等〕的诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。;常用免疫学检测技术：;一、酶免疫测定技术

(EnzymeImmunoassay,EIA);1、酶联免疫吸附试验

(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA);ELISA检测抗体;2、酶联免疫斑点法

〔Enzyme-LinkedImmunospotassay,ELISAPOT);CK抗体包被的反应板;二、免疫荧光显微技术

(ImmunofluorescenceTechnique);1、直接荧光法：

将荧光素直接标识抗体作标本染色。该法的长处

是特异性强，但其缺陷是每检测一种抗原必须制

备对应的荧光抗体。;2、间接荧光法：

用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标识的二抗染色。该法的长处是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标识的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增长。;间接免疫荧光法示意图;3、补体结合免疫荧光法：

此法是在间接法的第一步抗原—抗体反响时参与补体，使之与抗原—抗体复合物结合；再用荧光素标识的抗C3抗体进行示踪。;三、免疫印迹技术(Immunoblotting);免疫印迹法示意图;四、流式细胞技术

〔FlowCytometry,FCM);BDFACSVantage;;细胞膜

细胞器

细胞浆

细胞核

代谢;流式细胞仪对目的细胞的识别需要借助对MARKER进行

标识的荧光素;用荧光标识抗体;1、流式细胞仪工作原理;操作流程图;单细胞悬液

大多数仪器是在50-300μm大小的孔径中,将细胞悬液

注射进入鞘液中

这一过程,成为流体动力学聚焦;1〕常见临床检测标本的打算;血液或骨髓：EDTA-K2〔1.5～2mg/ml〕抗凝

培养细胞样品：

胰蛋白酶消化PBS吹打悬浮低速离心5min

PBS洗涤2次PBS悬浮沉淀细胞;体液和多种灌洗液：包括脱落细胞、胸腹水细胞、

尿液、内镜刷检细胞等

离心取沉淀细胞PBS洗涤2次尼龙网过滤

PBS悬浮;

多种组织：包括新奇实体组织样本、组织活检或内镜取材标本

酶消???法

机械法尼龙网过滤PBS洗涤2次

化学处理法;2〕免疫荧光染色;荧光素标识的单抗直接染色

操作简便

背景染色低;;;双色免疫荧光染色;染色措施;荧光染料的种类及荧光光谱;;荧光染色对比的设置;3〕检测的一般环节;4〕流式细胞术在免疫学中的应用;①外周血淋巴细胞亚群检测;;CD4+T细胞;白细胞的精细分析：5色6个标识辨别多种白细胞亚型。;对比;②HIV感染患者CD4阳性T细胞的绝对计数;Flow-Count微球;绝对计数值

相对计数值

蛋白体现强度;③CD34+造血干细胞计数;CD34：0.31%;④强直性脊柱炎〔AS〕的诊断;强直性脊椎炎支持诊断;⑤血小板测定;出凝血疾病检测;外周血血小板活化〔CD62p/CD63〕的检测;⑥白血病分型;正常造血各系列细胞分化阶段抗原体现;白血病细胞的抗原异常体现模式重要有如下几种：

1，跨系体现；

2，抗原体现不一样步；

3，抗原体现增长或缺失；

4，细胞SS变化

5,DNA检测到异倍体

?;正常骨髓－CD45/CD33/CD71三色染色;正常骨髓;⑦细胞内细胞因子的检测;Ⅰ、活化的淋巴细胞分泌细胞因子检测

;体外激活细胞，使其产生细胞因

子，克制胞内细胞因子向胞外转

移;Ⅲ、应用

;⑧免疫调整细胞分析;FoxP3isexpressedonasignificantpercentageofCD4+TcellsindependentofCD25expression.HumanPBMCswerecellsurfacestainedusingacombinationofanti-CD4andanti-CD25mAbs.Oncefixed,thecellswerestainedadditionallywithanti-FoxP3mAb.Dataarerepresentativeof20