DB22T 1608-2012 牛病毒性腹泻粘膜病病毒荧光RT-PCR检测方法　.pdfVIP

ICS65.020.30

B41

备案号：35742-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1608—2012

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒荧光

RT-PCR检测方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofBovineviraldiarrhea/mucosal

disease

2012-12-01发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1608—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局技术中心。

本标准主要起草人：孟庆峰、王伟利、吴连鹏、王玮琳、肖成蕊、蔡阳、宋战昀、孟日增。

I

DB22/T1608—2012

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了牛病毒性腹泻/粘膜病病毒（bovineviraldiarrhea/mucosaldisease，BVDV）荧光

RT-PCR检测方法。

本标准适用于牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Ct值：达到阈值的循环数（CycleThreshold）

DEPC：焦碳酸乙二酯（Diethylpyrocarbonate）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

荧光RT-PCR：荧光逆转录聚合酶链反应（RealTimeFluorescentQuantitativeReverse

TranscriptionPolymeraseChainReaction）

4原理

采用TaqMan方法，比对牛病毒性腹泻/粘膜病病毒基因组5端非编码区最保守的核苷酸序列，设计

特异性引物和特异性的荧光双标记探针进行配对。探针5端标记FAM荧光素为报告荧光基团（用R表示），

3端标记TAMRA荧光素为淬灭荧光基团（用Q表示），它在近距离内能吸收5端荧光基因发出的荧光信号。

PCR反应进入退火阶段时，引物和探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q

基因所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时，Taq酶的5到3的外切核酸酶功能将

探针降解。这样探针上的R基团游离出来，所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反

应的循环进行，PCR产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

5试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水；所有试剂均用无RNA

酶的容器分装。

5.1试剂

1

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5.1.1水：配制方法见附录A.1。