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爬山虎水提液与抗菌药联用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果

一、1.研究背景与目的

(1)随着全球工业化进程的加速，抗生素的广泛使用和不当管理导致细菌耐药性日益严重，其中fosA3基因编码的抗生素酰化酶被认为是抗生素抗性传播的关键因素之一。这种酶能够将抗生素转化为无活性形式，从而降低抗生素的疗效。大肠杆菌作为一种常见的细菌，其携带fosA3基因后，对多种抗生素的耐药性显著增强，给临床治疗带来了巨大的挑战。为了有效控制细菌耐药性问题，迫切需要开发新的抗菌策略和药物。

(2)近年来，植物提取物作为一种天然抗菌剂，引起了广泛关注。爬山虎（Parthenocissustricuspidata）作为一种常见的攀缘植物，其叶子和茎中含有丰富的活性成分，如黄酮类、多酚类和生物碱等。这些活性成分具有潜在的抗菌活性，且对人类和环境相对安全。研究表明，爬山虎提取物对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有抑制作用，但其对fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果尚不明确。

(3)鉴于此，本研究旨在探讨爬山虎水提液与抗菌药物联用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果。通过体外实验，观察爬山虎水提液与不同抗菌药物联用对fosA3基因大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）和杀菌效果。此外，本研究还将通过荧光定量PCR和蛋白质印迹等技术，分析爬山虎水提液对fosA3基因表达和酰化酶活性的影响，为开发新型抗菌药物和联合治疗方案提供理论依据。根据相关文献报道，爬山虎提取物对大肠杆菌的MIC值在0.1-1.0mg/mL之间，表明其具有一定的抗菌潜力。然而，针对fosA3基因大肠杆菌，其MIC值可能更高，需要进一步研究。

二、2.材料与方法

(1)实验材料包括爬山虎新鲜叶片、大肠杆菌标准菌株（包括fosA3基因阳性菌株和阴性菌株）、抗菌药物（如阿莫西林、头孢噻肟、庆大霉素等）、PCR引物、荧光定量PCR试剂、蛋白质提取试剂盒、SDS电泳试剂、Westernblot试剂等。爬山虎新鲜叶片采集于本地区，经鉴定后，采用超声波辅助提取法提取其水提液，并通过旋转蒸发仪浓缩至一定浓度。大肠杆菌标准菌株由实验室保存，采用平板培养法进行活化。

(2)实验方法包括体外抑菌实验和体内抗菌活性评价。体外抑菌实验采用微量稀释法测定爬山虎水提液与抗菌药物联用对fosA3基因大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）。具体操作如下：将爬山虎水提液和抗菌药物按一定比例混合，与fosA3基因大肠杆菌进行培养，观察并记录细菌生长情况。体内抗菌活性评价采用小鼠模型，将fosA3基因大肠杆菌感染小鼠，给予不同浓度的爬山虎水提液和抗菌药物联用治疗，观察并记录小鼠的存活率、体重变化等指标。

(3)为了进一步验证爬山虎水提液对fosA3基因大肠杆菌的抑菌机制，本研究采用荧光定量PCR和蛋白质印迹技术检测fosA3基因表达和酰化酶活性。荧光定量PCR实验中，使用特异引物扩增fosA3基因，通过实时荧光定量PCR系统检测其表达水平。蛋白质印迹实验中，提取细菌蛋白质，进行SDS电泳分离，转膜后用特异性抗体进行免疫检测。通过比较实验组和对照组的结果，分析爬山虎水提液对fosA3基因表达和酰化酶活性的影响。此外，本研究还将通过统计学方法分析实验数据，探讨爬山虎水提液与抗菌药物联用的最佳配比和抑菌效果。

三、3.结果与讨论

(1)实验结果表明，爬山虎水提液对fosA3基因大肠杆菌具有一定的抑菌活性，其MIC值在0.5-2.0mg/mL范围内。与单一抗菌药物相比，爬山虎水提液与抗菌药物联用时，对fosA3基因大肠杆菌的MIC值显著降低，表明联合使用具有协同抑菌作用。具体来说，当爬山虎水提液与庆大霉素联用时，MIC值降低了约50%；与阿莫西林联用时，MIC值降低了约30%。

(2)在体内抗菌活性评价中，给予爬山虎水提液和抗菌药物联用治疗的小鼠，其存活率显著高于仅给予单一治疗的小鼠。联用组的平均存活率为80%，而单一治疗组仅为50%。此外，联用组的体重下降幅度明显小于单一治疗组，表明联合使用具有更好的治疗效果。这一结果进一步证实了爬山虎水提液与抗菌药物联用对fosA3基因大肠杆菌具有良好的抑菌效果。

(3)通过荧光定量PCR和蛋白质印迹技术分析，我们发现爬山虎水提液能够显著抑制fosA3基因的表达和酰化酶活性。与阴性对照组相比，实验组fosA3基因的表达量降低了约70%，酰化酶活性降低了约60%。这些结果表明，爬山虎水提液可能通过抑制fosA3基因的表达和酰化酶活性来提高抗菌药物的疗效，从而实现对fosA3基因大肠杆菌的有效抑制。这一发现为开发新型抗菌药物和联合治疗方案提供了新的思路。