植物组织DNA的提取、分离.pptVIP

植物组织DNA的提取、分离基础生物化学实验学时：82009年11月2日1、学习并掌握用CTAB法提取植物总DNA的原理和方法。一、实验目的：2、学习并掌握核酸组分的分离技术——琼脂糖凝胶电泳方法核酸在植物体内多与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在，因此提取分离核酸时，必须使核酸与蛋白质解离，并除去蛋白质和多糖等杂质。01本实验先将植物材料速冻、研磨，破碎细胞壁，然后加入十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与蛋白质及多糖等杂质分开。一定浓度的CTAB与核酸结合形成复合物，该复合物溶于高浓度的盐溶液，（而在低盐溶液中沉淀）再经氯仿－异戊醇抽提、离心，除去蛋白质等杂质，上清液中加入异丙醇，沉淀DNA，而CTAB溶于异丙醇。02二、实验原理:琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖或优质琼脂粉作支持介质的一种电泳分离方法。它主要用于大于或等于1Kb核酸的分离。有电荷效应和分子筛效应。其迁移率的大小，主要与DNA分子大小和空间构象有关。其次，凝胶浓度、电泳电压、PH值也会影响迁移率。核酸区带观察，是利用核酸与EB结合，在紫外光下可发出橙黄色荧光的性质，借助于紫外观测仪来进行。实验材料：三叶草叶片仪器：电热恒温水浴锅(2)离心机液氮罐(4)研钵等三、实验材料、仪器和试剂：3、试剂