植物组织培养的基本技术与设施.pptVIP

（一）、试管苗的特点试管苗的生态环境高温且恒温；高湿；弱光；无菌。试管苗的特点试管苗生长细弱，茎、叶表面角质层不发达；试管苗茎、叶虽呈绿色，但叶绿体的光合作用较差；试管苗的叶片气孔数目少，活性差；试管苗根的吸收功能弱。试管苗和普通苗的根解剖比较蓝莓（二）、试管苗的驯化驯化的目的:在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试管苗健壮，最终达到提高试管苗的移栽成活率。驯化的原则：应从温度、湿度、光照及有无菌态等环境要素进行，驯化开始数天内，应和培养时的环境条件相似；驯化后期，则要与预计的栽培条件相似，从而达到逐步适应的目的。驯化的方法:炼苗由培养室转移到半遮荫的自然光下锻炼，在自然光下恢复植物体内叶绿体的光合作用能力和健壮度打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，这样幼苗周围的环境就会逐步与自然环境相似。试管苗的驯化（三）、试管苗的移栽常规移栽法直接移栽法嫁接移栽法指选取生长良好的同一植物的实生苗或幼苗作砧木，用试管苗作接穗进行嫁接的方法。提高试管苗移栽成活率的途径试管苗的生理状况植物生长调节物质无机盐浓度活性炭环境因子移栽过程中试管苗从无菌向有菌逐渐过渡进行植物组织培养需要哪些设备？各有何作用?植物组织培养主要包括哪些环节?各环节的主要工作内容是什么?培养基包括哪些基本成分?其作用是什么?如何配制?如何对外植体、培养基、培养器皿、接种器械进行灭菌？离体培养的植物材料对光、温、湿度有何要求？如何调控？何谓玻璃化？何谓褐化？如何克服？复习思考题第二节实验室的设计与设备外植体的选择外植体的灭菌外植体的接种和培养外植体的成苗途径污染的原因及其预防措施外植体的褐变及其防止措施培养物的玻璃化现象及其防止措施试管苗的驯化与移栽第一节植物组织培养的操作方法概述外植体（Explants）：指植物离体培养的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体。外植体的选择依据优良的种质健壮的植株大小适宜的外植体适宜的发育时期适宜的部位适宜生理状态和发育年龄的器官细胞培养材料的选择一、外植体的选择外植体灭菌的一般步骤外植体的灭菌常用灭菌剂的使用及其效果各种外植体的灭菌方法01.02.03.04.（一）常用消毒剂消毒剂使用浓度（％）去除的难易消毒时间（分）效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗菌素硝酸银9～102饱和溶液1～210～120.1～170～754～5（mg/L）1易易易易最易较难易中较难5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好较好好自:曹孜义将适当浓度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸钠)(含有几滴活化剂Tween20或Tween80)，使材料完全浸没在消毒液中，盖上盖，把玻璃瓶置入超净工作台灭菌一定时间。在灭菌期间须把玻璃瓶摇动2～3次。预处理，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料，其表面仍有很多细菌和真菌。消毒处理后，将瓶盖打开，将消毒液倒出，注入适量的无菌蒸馏水，再盖上盖，摇动数次，将水倒掉，重复3～4次。将植物组织块置于一个有丝盖的玻璃瓶中，注入75%的酒精溶液埋没材料，浸泡10S左右。倒出酒精，用无菌水冲洗一次。2341（二）外植体灭菌的一般步骤消毒前要经自来水较长时间的冲洗。消毒时要用70%的酒精浸泡数秒，无菌水冲洗2～3次，然后用2%～10%的次氯酸钠溶液浸泡10～25min，若材料有茸毛最好在消毒液中加入几滴吐温-80，或者用0.1％～0.2％升汞浸泡消毒5～10分钟消毒后，用无菌水冲洗3次后方可接种。1、茎尖、茎段及叶片等的消毒01用自来水冲洗10～20分钟或更长，用纯酒精迅速漂洗一下。果实用2%次氯酸钠溶液浸10min后，用无菌水冲洗2～3次。种子要先用10%次氯酸钠浸泡20～30min甚至几小时。对难以消毒的还可用0.l%升汞或1%～2%溴水消毒5min。胚或胚乳培养时，对种皮太硬的种子，可先去掉种皮，再用4%～10%的次氯酸钠溶液浸泡8～10min，经无菌水冲洗后，即可取出接种。2、果实及种子的消毒02（三）几种外植体的灭菌方法3、花药的消毒70％酒精擦洗花蕾，或浸泡数秒钟饱和漂白粉上清液：浸泡10分钟；或次氯酸钠液2％～5％：8～10分钟无菌水冲洗