环境微生物省公开课一等奖全国示范课微课金奖课件.pptx

环境微生物试验

环境科学与工程学院

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试验一培养基制备

培养基是用人工方法将各种营养物质按微生物生长代谢需要配制成一个营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且百分比适当水分、碳源、氮源、无机盐、生长原因以及一些特需微量元素外还应含有适宜酸碱度〔pH值〕、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。

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一、试验目标

学习和掌握配制培养基普通方法和步骤

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二、试验器材

(1)药品和试剂：牛肉膏、蛋白陈、NaCl、10％NaOH溶液、l0％盐酸溶液。可溶性淀粉、K2HPO4、MgSO4·7H2O、KNO3、NaCl、FeSO4·7H2O、琼脂、10％NaOH溶液、10％盐酸。

(2)器材：小烧杯、小铝锅、天平、牛角匙、1000mL刻度烧杯、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉花。

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三、方法与步骤

1、牛肉膏蛋白胨培养基配制

(1)培养基配方：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g、NaCl5.0g、琼脂20.0g、自来水1000mL、pH7.0。

(2)操作步骤：

1）称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随即放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，马上取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要快速。

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2）加热溶解在烧杯中加入少于所需要水量，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好琼脂放入已溶解药品中，再加热融化，此过程中．需不停搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最终补足所失水分。

3）调pH检测培养基pH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol•L-1NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至到达所需pH范围。若偏碱，则用1mol•L-1HCl进行调整。pH调整通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子浓度。

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4）过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果观察。不过供普通使用培养基，该步可省略。

5）分装披试验要求，可将配制培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染(见图4－1)。

分装量：固体培养基约为试管高度1／5，灭菌后制成斜面（图4－2）。分装入三角瓶内以不超出其容积二分之一为宜。半固体培养基以试管高度1/3为宜．灭菌后垂直待凝。

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6）加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作棉塞，棉塞制作方法如图4—3。棉塞形状、大小和松紧度要适当，四面紧贴管壁，不留缝隙，才能起到预防杂菌侵入和有利通气作用。要使棉塞总长约3／5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更加好通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。

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7）包扎加塞后，将三角瓶棉塞外包一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。

8）培养基灭菌时间和温度，需按照各种培养基要求进行，以确保灭菌效果和不损培养基必要成份。培养基经灭菌后，必须放37℃温室培养24h，无菌生长者方可使用。

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图例

图4－1培养基分装图4－2斜面制作

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图4－3棉塞制作方法

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2、高氏一号培养基制备

(1)培养基配方：可溶性淀粉20g、KNO31.0g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O0.5g、NaCl0.5g、FeSO4·7H2O0.01g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH7.2~7.4。

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(2)操作步骤：

1）称量和溶解先计算后称量，按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少许冷水将其调成糊状，再加少于所需水量沸水中，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶解。再加入其它成份依次溶解。对微量成份FeSO4·7H2O可先配成高浓度贮备液后再加入，方法是先在100mL水中加入1gFeSO4·7H2O，配成浓度为0.01g•L-1贮备液，再在1000mL培养基中加入以上贮备液1mL即可。待全部药品完全溶解后．补充水分到所需总体积。如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。

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2）pH调整、分装、包扎、灭菌及无菌检验同牛肉膏蛋白胨培养基配制。

3．惯用真菌培养基配方

（1）马铃薯培养基：用以分离培养霉菌、酵母菌

马铃薯(去皮)200g

葡萄糖(或蔗糖)20g

琼脂20g

水1000mL

pH自然121℃