2025年化学分析中HPLC方法与应用进展.pdfVIP

乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

自HPLC仪问世以来，其硬件技术、分析方法及应用研究发展迅速。本文仅就在食品化学分析

中，HPLC分析技术与应用进展概述如下。

一、HPLC分析方法进展

●液-固色谱法（LSC）LSC是根据组分基团对吸附剂表面亲和力的大小，决定了其保留程度。在

LSC色谱中应用最广泛的极性固定相是硅胶。

●反相色谱法（RPC）RPC是指在非极性固定相上的液相色谱法，固定相多为化学键合相。其代表

为ODS。目前，某些极性键合相，如氨基键合相也广泛应用于反相色谱中。反相色谱可分离离子

型和非离子型化合物。据统计，在食品化学HPLC分析中，90%以上的分析过程都是反相色谱法。

●离子对色谱（IPC）IPC又称为离子对分配色谱，是近年来发展较快的一种色谱技术。目的是应

用液-液分配色谱实现对强电解质和弱电解质混合物，或对电解质和非电离物质混合物的分离。IPC

根据固定相和流动相的相对极性分为正相和反相方式，但反相IPC应用较多，如氨基酸、多肽、核

酸、各种药物、有机酸的分析。

●离子色谱法（IC）IC法是HPLC中用于分离分析离子型化合物的方法，按分离机理的不同，IC

可分为高效离子交换色谱法（HPIC）、高效离子排斥色谱法（HPICE）和流动相离子色谱法

（MPIC）。HPIC主要用于亲水阴、阳离子和碳水化合物的分离；HPICE多用于无机弱酸、有机

酸、氨基酸、醛、醇的分离；MPIC可用于疏水性阴、阳离子和过渡金属配合物的分离。IC分析多

种阴离子快速、灵敏、选择性好。目前许多国家建立了采用IC法测定水质中阴、阳离子的标准检

验法；AOAC已批准四项用于食品分析的IC法。

●反相胶束色谱法（RPMC）在反相离子对色谱中，当反离子采用表面活性剂超过一般离子对色谱

所用的浓度时（达0.02～0.2mol/L），此时的反相色谱称为RPMC。RPMC分为正反相胶束色谱。

特点是具有高度的选择性，有利于梯度洗脱，提高了检测灵敏度。主要应用于血清、尿液中药物浓

度测定，其优点是样品可直接进样分析，分析时间短，样液量少，准确度高。

●空间排阻色谱法（SEC）又称为体系排阻色谱法，是利用多孔凝胶固定相，依据分子大小差异来

进行分离的方法。根据凝胶性质可分为凝胶过滤色谱法（GFC）和凝胶渗透色谱法（GPC）。SEC

适用于需很快提供未知样品分子大小、组成、近似分子量信息。GFC适用于分析水溶液中多肽、蛋

白质、核苷酸、多糖等；GPC主要用于高聚物的分子测定。如聚乙烯、聚氯乙烯等精细化工原料。

●间接光度液相色谱法间接光度液相色谱检测技术是一项正在发展中的色谱技术，在离子和离子对

色谱中都有应用。该法是对于无紫外吸收的样品采用UVD来检测的方法。优点是扩大UVD的应

用范围，可用于低响应或无响应的样品。多用于无机和有机阴离子的测定。。

●化学衍生液相色谱法它是采用衍生试剂，借助化学反应给样品组分化合物分子接上某个特殊基

团，使其衍生物能够改善分离效果和提高检测灵敏度的方法。可分为柱前和柱后衍生法。衍生试剂

有多种，可与胺类、氨基酸、酚、醇等发生衍生化反应。

二、HPLC检测器应用进展

(一)检测器与应用进展

●激光诱导荧光检测器（LIF）LIF与普通荧光检测器的主要区别是其以激光器做为光源。因此，

其单色性好，谱带宽度可达10-8nm以下，使溶剂的瑞利散射光和拉曼散射光的带宽为1.0nm，因

而可选择地消除对荧光性号的干扰；聚光性好，聚光点直径几微米，可减小流通池体积，适用于微

型和毛细管液相色谱；具有最高的灵敏度（10-9mol/L～10-12mol/L），对一些荧光效率高的物质

可达到单分子检测。

长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。——李白

●电化学检测器（ECD）ECD是根据物质的电还原性和电氧化性来进行检测的，应用于对紫外光

没有吸收或不能发出荧光，但具有电活性的物质测定。若结合衍生技术，也可应