日照市2022级（2025届）高三一模 生物试卷（含答案）.pdf

25.(

12分）细菌中的酶X感受外界刺激后，利用ATP将参与细菌正常代谢的M蛋

臼磷酸化，磷酸化的M蛋白积累会抑制细菌的生长，酶Y可将磷的M蛋白去磷酸

酸化

化。为筛选更高效的酶Y，研究人员用X基因〈编码酶X）、Y基因〈编码酶Y）和GFP

基因〈编码绿色荧光蛋白）拼接出3种融合基应i.®图1，分别导人大肠杆菌（同时缺失λ

基因和Y基因J!f5构建代谢通路。

GFPS基罔X基因Y基因

M3

启动子融合基因a…··§主§芸芸芸运

与｜物4

GFP基因X基因

复制融合基因b…IIIIE§§§§宝宝司

原点GFP基因Y基因

融合基因c

图1

(1）以融合基因a和质粒构建基因表达载体导λ犬肠杆菌后，在含卡那霉素的培养

基上筛选到多个抗性菌落，为检测菌落中是否携带融合基因a，将图中4种引物共

同加入

反应体系后，分别以抗性菌落的DNA为模板进行PCR扩增。理论上携带正确重组质粒

的PCR产物电泳结果应出现的条带数目为。结果显示，有两个菌落中的PCR产

物的电泳条带数均为上述结果，但其中2条带的位置不同，其原因可能是

(2）用融合基因b转化大肠杆菌后，为检测获得的工程菌内融合基因b是否完整表

达以及X蛋白的活性，首先从具有特征的菌落中提取蛋白质并检测X蛋白，然

后在不同泳道中添加相关物质，添加情况与X蛋白的表达情况也图2所示。后续实验用

磷酸化抗体（特异性识别磷酸化的M鱼臼）检测，通过泳道（填图中序号〉是

否出珑阳性结果来判断X蛋白的活性。

－

－＋

M蛋白＋

ATP

.

+

+

--

.

I---IX蛋白