《高效液相色谱HL》课件.pptVIP

高效液相色谱(HPLC)高效液相色谱(HPLC)是一种用于分离、鉴定和定量分析混合物中不同组分的强大技术。HPLC在药物发现、环境监测、食品安全和生物技术等各个领域具有广泛的应用。作者：

课程大纲11.高效液相色谱技术概述概述高效液相色谱的概念、发展历史、应用领域以及与其他色谱方法的比较。22.高效液相色谱的基本原理讲解高效液相色谱的分离原理，包括固定相、流动相、样品在色谱柱中的迁移等。33.高效液相色谱仪器结构及组成介绍高效液相色谱仪器的主要部件，包括泵、进样器、色谱柱、检测器、数据处理系统等。44.高效液相色谱柱的选择讲解选择高效液相色谱柱的原则，包括固定相类型、粒径、长度、内径等因素的考虑。

高效液相色谱技术概述高效液相色谱(HPLC)是一种强大的分离技术，在各个领域应用广泛。HPLC主要用于分析复杂样品，通过分离不同组分，然后进行定量分析。HPLC结合了多种分离模式，可以分析各种化合物，例如药物、食品成分、环境污染物等。

高效液相色谱的基本原理高效液相色谱（HPLC）是利用不同物质在固定相和流动相之间分配系数不同，使混合物中各组分分离，是一种常用的色谱技术。流动相是指不断流动的液体，固定相指填充在色谱柱中的固定物质，根据流动相和固定相的性质不同，HPLC可分为正相色谱、反相色谱等。样品组分在流动相中不断地通过固定相，由于各组分与固定相之间的相互作用力不同，导致在固定相中停留的时间不同，进而使各组分分离。HPLC主要用于定量和定性分析，在药物分析、食品检测、环境监测、生物化学等领域应用广泛。

高效液相色谱仪器结构及组成泵高压泵用于将流动相以恒定流速送入色谱柱，保证流动相的稳定性。进样器进样器用于将样品引入色谱柱，确保样品准确、快速地注入。色谱柱色谱柱是分离样品的关键部件，不同的色谱柱适合分离不同的物质。检测器检测器用于检测流出液中的物质，并将其转化为电信号，用于记录数据。

高效液相色谱柱的选择固定相选择与分析物极性匹配的固定相，例如正相色谱适合分析非极性化合物，反相色谱适合分析极性化合物。柱长柱长越长，分离效果越好，但分析时间也越长，需要根据实际情况选择合适的柱长。填料粒径填料粒径越小，分离效果越好，但流动相阻力越大，需要根据仪器性能和分析速度选择合适的粒径。选择性根据分析物的化学性质和目标分离效果，选择合适的色谱柱，例如选择特定功能的色谱柱来提高分离度。

色谱柱填料的类型与特点正相填料极性填料，如硅胶、氧化铝，用于分离非极性样品，洗脱剂为极性溶剂。反相填料非极性填料，如烷基键合硅胶，用于分离极性样品，洗脱剂为非极性溶剂。离子交换填料带电荷的填料，用于分离离子型样品，洗脱剂为含有不同离子浓度的溶液。疏水作用填料疏水性填料，用于分离根据疏水性不同的样品，洗脱剂为水溶性溶剂。

高效液相色谱的检测器紫外可见检测器紫外可见检测器利用物质对特定波长的紫外可见光吸收的特性进行检测，应用广泛，灵敏度较高。荧光检测器荧光检测器利用物质在紫外光激发下产生荧光的特性进行检测，灵敏度更高，适用于荧光物质的检测。折光指数检测器折光指数检测器利用物质的折光率变化进行检测，适用于无紫外吸收的物质，灵敏度较低。电化学检测器电化学检测器利用物质在电极上发生的氧化还原反应进行检测，灵敏度高，适用于痕量物质的检测。

高效液相色谱分析中的漂移问题及解决基线漂移基线漂移是指色谱图中的基线随时间发生缓慢变化，可能是由于仪器系统不稳定、环境温度变化或流动相组成发生变化引起的。峰高漂移峰高漂移是指相同物质在不同时间分析时，峰高出现明显差异，可能是由于进样量不一致、色谱柱性能变化或检测器响应不稳定等原因引起的。峰面积漂移峰面积漂移是指相同物质在不同时间分析时，峰面积出现明显差异，可能是由于进样量不一致、色谱柱性能变化或检测器响应不稳定等原因引起的。解决方法针对不同类型的漂移，可以采取相应的解决方法，如优化仪器系统、控制环境温度、更换流动相等。

高效液相色谱中的色谱保留时间保留时间定义保留时间是指样品组分从进样到检测器的时间。保留时间是色谱分析中的关键参数，它可以用来识别和定量样品中的不同组分。影响因素保留时间受多种因素影响，包括流动相的性质、色谱柱的特性、样品本身的性质，以及温度等。应用保留时间可以用来识别和定量样品中的不同组分，例如在药物分析、食品分析、环境分析等领域。

高效液相色谱中峰型的评价对称峰对称峰形表示色谱分离过程良好，分析物在色谱柱中均匀分布。拖尾峰拖尾峰形表示分析物与色谱柱填料之间存在较强的相互作用，导致峰形不对称。前沿峰前沿峰形表示分析物在色谱柱中过早洗脱，可能由进样量过大或溶剂不匹配引起。

高效液相色谱的洗脱模式与洗脱梯度1等度洗脱单一溶剂2梯度洗脱多种溶剂3程序升温温度变化等度洗脱是使用单一溶剂进行洗脱，适用于分离极性相近